桑黄菌丝体和子实体中活性多糖的分离纯化及结构特征研究-食品工程专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 上海海洋大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位 论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除 文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集 体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我 对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 上海海洋大学学位论文版权使用授权书 学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定， 同意学校保 留并向 国家有关 部门或 机构送交 论文的 复印件和 电子 版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位 论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本学位论文属于 保密 □ ，在 年解密后适用本版权书。 不保密 □ 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日期： 年 月 日 日期： 年 月 日 上海海洋大学硕士学位论文 答辩委员会成员名单 姓名 工作单位 职称 备注 张劲松 上海市农科院 研究员 主席 唐庆九 上海市农科院 研究员 委员 吴文惠 上海海洋大学 教授 委员 委员 委员 委员 委员 刘艳芳 上海市农科院 副研究员 秘书 答辩地点 食用菌所会议室 答辩日期 2014-05-27 上海海洋大学硕士论文 上海海洋大学硕士论文 桑黄菌丝体和子实体中 活性多糖的分离纯化及结构特征研究 摘要 桑 黄 是 一 种 多 年 生 、 黄 褐 色 的 珍 稀 药 用 真 菌 ， 隶 属 于 担 子 菌 亚 门 （Basidiomycota）、层菌纲（Hymenomycetes），非褶菌目 （Aphyllophorales），锈 革孔菌科（Hymenochaetaceae），针层孔菌属（Phellinus）。研究报道，桑黄多糖是 桑黄的主要生物活性物质，具有明显的降血糖、抗氧化、护肝、调节免疫等药理 作用。桑黄多糖可以从子实体获得也能从发酵菌丝体中获得，子实体和液体发酵 菌丝体多糖已有报道但固体发酵菌丝体还少有报道，同时从不同培养方式获得的 桑黄多糖其理化特征及活性有何差异还没有研究。本论文针对筛选的桑黄同一菌 株子实体栽培、固体发酵和液体发酵培养提取的桑黄多糖的结构特征及生物活性 进行研究比较。并对其活性多糖进行分离纯化，对分离得到的均一多糖进行结构 鉴定，比较不同培养方式对桑黄多糖结构特征及生物活性的影响，探索桑黄菌丝 体替代子实体开发利用的可行性。本论文分为五个部分，主要研究结果如下： 1、不同来源桑黄菌株亲缘关系的分析及多糖高产桑黄菌株的筛选 对收集的国内外 10 个桑黄菌株进行液体摇瓶发酵培养，采用拮抗实验及 ITS 序列分析对所收集的桑黄菌株进行鉴定和分析。构建基于 ITS 序列的系统发育树， 聚成 7 个 Group。结果发现 Group Ⅰ中的 SH1、SH2、SHA、SHD 及 W 菌株归属 为 I. sanghuang；Group Ⅱ中的菌株 PI 和 SHC 为 I. vaninii； GroupⅤ中的 PL 和 Group Ⅵ中的 SH 菌株应归属为 I. baumii。菌株 H 则自成一组，其与上述菌株的亲 缘关系较远。 对 10 个菌株进行液体发酵培养，比较了 10 个桑黄菌株的菌丝生物量、胞内 多糖及胞外多糖产量。可以发现 I. sanghuang 菌属的 SH1 的菌丝体生物量、胞内 多糖产量和胞外多糖产量均高于其他菌株。SH1 的胞内多糖产量达到 59.5 mg/100 mL，胞外多糖产量为 1.475 g/L。所以选取 I. sanghuang 菌属的 SH1 分别进行子实 体栽培、液体发酵和固体发酵培养；培养后对其多糖含量进行分析表明，菌丝体 多糖含量最高为 4.06 %，其次是子实体多糖含量 3.51%，固体发酵产物的多糖含量 较低，只有 1.98%。 2、桑黄子实体和液体、固体发酵菌丝体中粗多糖组分的制备，多糖理化性质 及生物活性的比较 采用水提乙醇分级沉淀的方法制备了 3 种培养方式得到的桑黄子实体和菌丝 I 体粗多糖样品，根据乙醇沉淀浓度分别命名为 FP30，FP50，FP70（子实体栽培多 糖）；LP30，LP50，LP70（液体发酵菌丝体多糖）和 SP30，SP50，SP70（固体发 酵菌丝体多糖）。分析发现桑黄液体发酵菌丝体的多糖得率、多糖及蛋白质的含量 均高于子实体以及固体发酵菌丝体。从工业化生产的角度来说，液体发酵有利于 提高桑黄多糖的产量。固体发酵的多糖得率偏低，且多糖含量低于子实体及液体 发酵菌丝体，不适合工业化生产。 子实体和液体发酵菌丝体中，30 %醇沉组分（FP30 和 LP30）单糖组成均是以