山奈酚对脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用及其机制研究-药理学专业论文.docxVIP

重庆医科 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文全称 中文名称 KA kaempferol 山奈酚 MCAO Middle cerebral artery occlusion 中动脉闭塞 I/R Ischemia-reperfusion 缺血再灌注 TTC 2,3,5-Triphenyl-2H-tetrazolium 氯化三苯基四氮唑 PBS Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 HE Hematoxylin-eosin 苏木精-伊红染色 TNF-α Tumor necrosis factor alpha 肿瘤坏死因子-α IL-1β Interleukin 1-beta 白介素 1-β TLR4 Toll-like receptor4 Toll-样受体 4 MyD88 Myeloid differentiation factor 88 髓样分化因子 88 NF-κB Nuclear factor-κB 核转录因子κB ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附测定 IOD Integrated optical density 累积光密度值 AD Alzheimers disease 阿尔茨海默病 PD Parkinson’s disease 帕金森病 1 山奈酚对脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用 及其机制研究 摘要 目的：探讨山奈酚对局灶性脑缺血再灌注（ischemia-reperfusion， I/R）大鼠的神经保护作用及其作用机理，观察其对大鼠海马神经元超 微结构的影响，及对 TLR4(Toll-like receptor4，TLR4)/MyD88(myeloid differentiation factor 88，MyD88)/NF-κB(nuclear factor-κB，NF-κB) 通路的作用。 方法 1．实验动物分组：120 只雄性 SD 大鼠，重 260～300g，随机分为 6 组：假手术组、模型组、山奈酚低、中、高剂量组（5、10、20 mg·kg-1） 和尼莫地平组。 2 ． 改 良 线 栓 法 制 作 大 鼠 中 动 脉 闭 塞 （ Middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型，均缺血 1.5h 后进行再灌注 24h。观察山奈酚 对 MCAO 模型大鼠神经功能症状、脑梗死体积和 HE 染色后病理形态 学的影响，并通过透射电镜观察各组大鼠海马组织 CA1 区神经元超微 结构的变化。 3．免疫组化 SP 法检测大鼠皮质和海马组织 CA1 区 TLR4、MyD88 和 NF-κBp65 蛋白的表达，ELISA 检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子- α（TNF-α）和白介素 1-β（IL-1β）含量。 2 结果 1．神经功能评分：假手术组无神经功能缺损症状，模型组神经功 能评分高于假手术组（p0.01），证明建模成功。山奈酚 10 mg·kg-1、 20 mg·kg-1 给药组及尼莫地平组与模型组相比症状明显减轻（p0.01）。 山奈酚 5 mg·kg-1 组与模型组的评分无明显差异（P0.05）。 2．脑梗死体积：假手术组通过 TTC 染色后无白色梗死灶出现， 模型组与假手术组对比出现了明显的梗死灶（p0.01），证明建模成功。 山奈酚 10 mg·kg-1、20 mg·kg-1 给药组和尼莫地平组梗死体积明显减小 （p0.01）。山奈酚 5 mg·kg-1 组与模型组的梗死体积没有明显差异 （P0.05）。 3．HE 染色：假手术组海马神经元形态正常及结构完好，排列整 齐。模型组排列错乱，核固缩，损伤严重。证明建模成功。山奈酚各 给药组和尼莫地平组相对模型组有较大的改善。 4．电镜观察神经元：假手术组细胞膜和细胞核均正常，细胞器非 常丰富。模型组胞浆已空，且细胞核水肿。山奈酚各给药组和尼莫地 平组细胞损伤明显减轻，尤其是山奈酚 20 mg·kg-1 给药组和尼莫地平 组。证明山奈酚对受损的神经元有一定的保护的功效。 5．免疫组化：模型组皮质和海马 CA1 区 TLR4、MyD88 和 NF- κBp65 的表达均高于假手术组，各给药组的表达明显比模型组低，尤 其是山奈酚 20 mg·kg-1 给药组和尼莫地平组。 6．ELISA：模型组大鼠血清中 TNF-α和 IL-1β的含量明显较假手 术组高，各给药组明显较模型组降低，尤其是山奈酚 20 mg·kg-1 给药组 3 和尼莫地平组。 结论 山奈酚对局灶性脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用功效，其机 制可能是通过调节 TLR4/ MyD88/NF-κB 通路的表达。 关键词：山奈酚，脑缺血再灌注，超微结