快速老化痴呆小鼠听功能、耳蜗毛细胞和螺旋神经元的退行性变化-外科学专业论文.docxVIP

目录 中文摘要Ⅰ ABSTRACTⅢ 前言1 快速老化痴呆小鼠听功能、耳蜗毛细胞和螺旋神经元的退行性变 化4 1 材料和方法4 1.1 材料4 1.1.1 实验仪器4 1.1.2 实验试剂及耗材4 1.2 实验动物4 1.2.1 动物来源4 1.2.2 动物分组5 1.3 听功能（ABR 阈值）检测 5 1.4 耳蜗标本预处理5 1.5 耳蜗底回基底膜铺片，外毛细胞计数5 1.6 中轴位耳蜗石蜡切片制作、SGNs TUNEL 染色 6 1.6.1 耳蜗石蜡切片制作过程6 1.6.2 SGNs TUNEL 染色 7 1.7 统计学分析8 2 结果8 2.1 听功能（ABR 阈值） 8 2.2 耳蜗外毛细胞形态9 2.2.1 耳蜗底回基底膜铺片镜下观察9 2.2.2 耳蜗底回外毛细胞平均缺失率10 2.3 耳蜗 SGNs TUNEL 染色 11 2.3.1 各组小鼠耳蜗中轴位石蜡切片 SGNs 的 TUNEL 染色结果镜下观 察 11 2.3.2 耳蜗 SGNs TUNEL 染色阳性率 11 3 讨论12 3.1 老年性耳聋的听力学研究方法12 3.2 SAMP8 小鼠的行为学和听力学评价 15 结论17 参考文献18 附图22 综述24 致谢……………………………………………………………………..37 攻读学位期间发表的学术论文目录…………………………………..38 快速老化痴呆小鼠听功能、耳蜗毛细 胞和螺旋神经元的退行性变化 中文摘要 目的 本实验 旨 在 探 讨 快速老化 痴呆 小鼠（ Senescence accelerated dementia mouse/prone，SAMP8）的听功能、耳蜗毛细胞和螺旋神经元（spiral ganglion neurons，SGNs）的退行性变化特点。 方法 选用 3、9 月龄的 SAMP8 小鼠作为实验组，同龄的抗快速老化小 鼠亚系 1（Senescence accelerated mouse/resistance 1，SAMR1）作为对照组。 分别 对各组 小鼠 采用 8kHz 短纯音 听 性 脑 干 反 应 （ auditory brainstem response，ABR）检测双耳听功能（ABR 阈值）、耳蜗基底膜铺片毛细胞计 数计算左侧耳蜗底回外毛细胞平均缺失率、末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP 原位切口末端标记[terminal deoxynucle-otidyl transferase (TdT) dUTP nick end labeling] TUNEL 免疫组织化学染色观察右侧耳蜗中轴位石蜡切片 SGNs TUNEL 染色阳性率。 结果 1.听功能检测：实验组 3、9 月龄 SAMP8 小鼠的左耳 ABR 阈值 （dB SPL）分别为 36.5±3.81、52.6±3.00；对照组 3、9 月龄 SAMR1 小鼠 的左耳 ABR 阈值（dB SPL）分别为 35.7±0.82、37.2±1.47。实验组 3、9 月龄 SAMP8 小鼠的右耳 ABR 阈值（dB SPL）分别为 37.6±3.40、59.4±4.27； 对照组 3、9 月龄 SAMR1 小鼠的右耳 ABR 阈值（dB SPL）分别为 34.5± 1.05、36.3±2.07。实验组 9 月龄 SAMP8 小鼠与对照组 9 月龄 SAMR1 小鼠 双耳的 ABR 阈值差异均显著（P＜0.01）；而实验组 3、9 月龄 SAMP8 小鼠 双耳的 ABR 阈值亦有显著差异（P＜0.01）。 2.耳蜗毛细胞改变：耳蜗基底膜铺片光学显微镜下观察，与对照组比较, 随着月龄的增加,实验组 SAMP8 小鼠耳蜗底回外毛细胞缺失加重；各组小 I II II 鼠耳蜗底回外毛细胞平均缺失率（%）分别为：3 月龄实验组 SAMP8 小鼠 2.5±0.91、3 月龄对照组 SAMR1 小鼠 1.6±0.80；9 月龄实验组 SAMP8 小 鼠 19.5±3.73、9 月龄对照组 SAMR1 小鼠 2.7±1.11。实验组 9 月龄 SAMP8 小鼠与对照组 9 月龄 SAMR1 小鼠耳蜗底回外毛细胞平均缺失率差异显著（P ＜0.01）；而实验组 3、9 月龄 SAMP8 小鼠耳蜗底回外毛细胞平均缺失率亦 有显著差异（P＜0.01）。 3.耳蜗 SGNs TUNEL 染色：耳蜗 SGNs TUNEL 染色镜下观察，与对照 组比较,随着月龄的增加,实验组 SAMP8 小鼠耳蜗 SGNs TUNEL 染色阳性 率增高；各组小鼠耳蜗 SGNs TUNEL 染色阳性率（%）分别为：3 月龄实 验组 SAMP8 小鼠 3.18±1.70、3 月龄对照组 SAMR1 小鼠 2.14±1.39；9 月 龄实验