第八部分病原学诊断与防治.pptVIP

章病原学诊断与防治 节细菌学诊断 细菌学诊断——检测病原菌及其抗原，产物或核酸 血清学诊断——检测患者血清中特异性抗体 一、病原菌检测 标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。 根据致病菌在不同病期的体内分布和排出部位，采取不同标本。 应在使用抗菌药物前采集标本，否则在培养时应加入拮抗剂。 尽可能采集病变明显部位的材料。 标本必须新鲜，采集后尽快送检。 送检过程中要采取适当的保存方式。 标本做好标记，详细填写化验单，保证各环节的准确无误。 标本采集与送检原则 致病菌的检验程序 标本 直接涂片染色镜检 分离培养与鉴定 病原菌抗原检测 其它检测 形态、结构、染色性 涂片镜检 菌落特征 生化反应 药敏试验 血清学反应 沉淀反应 协同凝集 免疫荧光 对流免疫电泳 酶免疫测定 免疫印迹 细菌代谢产物（气相色谱） 细菌核酸 （PCR） 噬菌体分离 细菌素测定 分子生物学技术 动物试验 人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应答而产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价（滴度）的升高。因此，用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。一般采取病人的血清进行试验，故称为血清学诊断(serological diagnosis)。 血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者的抗体效价比前者升高大于等于4倍时方有意义。 常用方法：直接凝集试验、乳胶 凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、ELISA。 第二节 血清学诊断 第二节 病毒学诊断 一 标本的采集与送检（principle of collection specimen） 1 早期（前驱期、急性期、发病前1~2天） 2 根据不同病毒感染，采集不同部位标本 3 病毒易被灭活（细胞内寄生，怕热不怕冷），低温保存，快速送检 4 标本无菌采集与处理（加抗生素，除菌并防止污染） 5 血清学实验检查抗体（双分血清） 二 病毒的分离培养与鉴定（virus isolation and determination） （一）病毒的分离 方法 动物接种 选择易感动物及接种部位，观察发病情况 鸡胚培养 不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。 细胞培养：分离病毒最常用的方法 （1）原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。 （2）二倍体细胞—在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞。 （3）传代细胞—能在体外无限传代的细胞多由癌细胞或二倍体细胞突变而来。 病毒在培养细胞中增殖的指标 细胞的变化 （1）出现细胞病变效应（CPE）：即某些病毒在细胞内增殖引起的特有的细胞病变（细胞变圆、聚集、坏死、脱落等） （2）形成细胞融合（多巨核细胞） （3）形成包涵体：某些病毒在细胞浆或核内增殖后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。（病毒增殖场所） 红细胞吸附 干扰现象 细胞代谢改变（pH） 正常细胞 病变细胞 （二）病毒的数量与感染性测定 （三）新分离病毒的鉴定 核酸类型、理化性状、形态、血清学鉴定、基因测序和生物对比。 三、病毒感染的血清学诊断 用已知病毒抗原检测病人血清中相应抗体以诊断病毒性疾病（中和实验、补体结合实验、血凝抑制实验、凝胶免疫扩散等） 四、 病毒感染的快速诊断 (一)?? 形态学 电镜和免疫电镜——直接观察病毒 光镜—— 大病毒 和包涵体 （二）检测病毒蛋白抗原 用已知特异性抗体直接检测病毒蛋白抗原（简便、敏感、特异） 常用方法：免疫荧光技术（IF） 固相放射免疫测定（SPRIT） 酶免疫技术（EIA）等。 （三） 检测病毒特异性IgM抗体 检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染或证明病毒复制。