免疫细胞功能检测技术完整课件.ppt

对淋巴细胞群，中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞等功能测定可以有效评价机体特异性和非特异性免疫功能。 CFSE染色法 该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检测抗体分泌量。 优点： 稳定、特异、抗原用量少； 可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量；可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。 免疫细胞功能检测的临床应用 反映机体免疫功能状态。 肿瘤、免疫缺陷病等疾病的诊断和疾病预后监测。 组织器官移植后对受者的细胞免疫学功能监测则有利于排斥反应的早期发现，以便及时采取有效措施。 * * * * * 意义： 肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力 * * * * * * * * * * * （三）酶联免疫斑点试验 底物显色-测定抗体分泌量 计数着色斑点细胞-检测抗体分泌细胞 待检细胞 酶标记二抗 * (四)　体内试验 检测外周血中抗体的含量 将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判断受检者体内B细胞的功能。 * 染色计数 离心取上清 测LDH或 AKP 离心取沉淀 测活细胞荧光 测发光强度 测CPM 值 形态法 酶释法 荧光法 同位素法 化学发光法 NK细胞活性测定 靶细胞溶解 常用靶细胞: K562细胞株 YAC-1细胞株 * 吞噬细胞功能检测 小吞噬细胞—中性粒细胞 大吞噬细胞---单核细胞、巨噬细胞 吞噬细胞的吞噬活动大体分为趋化、吞噬和胞内杀灭作用三个阶段，据此建立相应的检测方法。 一、中性粒细胞功能检测技术 二、巨噬细胞功能检测技术 * 趋化 * 吞 噬 * 利什曼原虫（绿色）被哺乳动物的巨噬细胞（黄色）吞噬 巨噬细胞吞噬大肠杆菌 * 一、中性粒细胞功能的检测 细胞趋化功能的检测 吞噬和杀菌功能的检测 * (一) 细胞运动功能——趋化功能检测 1.原理： * 2. 方法学： 琼脂糖平板法 滤膜渗透法（Boyden 小室法） * (二)吞噬和杀菌功能测定 1．显微镜检查法： * 2. 溶菌法 * 3．NBT还原试验 * 4、化学发光法5、流式细胞仪检测 * 二、巨噬细胞功能检测 炭粒廓清试验 吞噬功能检测 溶酶体酶测定 细胞毒作用测定 巨噬细胞促凝血活性测定 比色法 流式细胞仪检测 * (一)炭粒廓清试验 正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90%炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)，间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。 * (二)吞噬功能检测 巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨噬细胞。 * (三)巨噬细胞溶酶体酶的测定 1．酸性磷酸酶的测定 硝酸铅法 偶氮法 2．非特异性酯酶的测定 常用α-萘醋酸法 * (四) 细胞毒作用测定 用IFN-γ激活小鼠巨噬细胞，观察其对125I-UdR标记的DBA/2小鼠肥大细胞瘤P815的杀伤活性。 * (五) 巨噬细胞促凝血活性测定 激活的巨噬细胞可产生一种与膜结合的凝血活性因子，加速正常血浆的凝固，为此取已经37℃预温的正常兔血浆和CaCl2混合液，加入经粘附有单层巨噬细胞的试管中，移置37℃，即时记录血浆凝固时间。 * 小结 T细胞功能检测 B细胞功能检测 NK细胞功能 淋巴细胞功能 吞噬细胞功能 T细胞增生试验 T细胞分泌功能测定 T细胞介导的细胞毒试验 体内试验 B细胞增生试验 溶血空斑试验 酶联免疫斑点试验 体内试验 形态学 酶释放法 放射性核素释放法 化学发光法 流式细胞仪法 * T细胞功能检测方法有哪些？ 什么是T细胞增殖试验的原理、刺激物及方法学？ B细胞功能检测的方法有哪些？ NK细胞活性测定的方法有哪些？ 思考题 * * * * * * * * * 免疫细胞功能检测技术 * 免疫细胞 是指参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞。 主要分为以下三类： 1、淋巴细胞：T细胞、B细胞、NK细胞 2、单个核吞噬细胞：包括血液中单核细胞和各种组织中的巨噬细胞, 树突细胞 3、其他细胞：包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞、血小板等。 * 白细胞 红细胞 单个核细胞 淋巴细胞 粒细胞 T淋巴细胞及其亚群 B淋巴细胞及其亚群 单核细胞 血小板 外周血 计数、功能检测 计数、功能检测 * 一、T细胞功能的检测（掌握） 二、B细胞功能的