不同脑微血管内皮细胞条件培养液抗缺血及再灌神经元损伤的比较.docxVIP

不同脑微血管内皮细胞条件培养液抗缺血 及再灌神经元损伤的比较 :青雪梅，李澎涛，胡京红，李卫红，侯金才，杜欢，王冰，索琳 【摘要】 通过乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)的检 测，观察解毒通络药物干预后的脑微血管内皮细胞条件培养液 (conditioned medium of cerebral microvascular endothelial cells, CMECs-CM)特征及其抗缺血及再灌皮质神经元损伤的效应，探讨 脑微血管内皮细胞(cerebral microvascular endothelial cells , CMECs)调控神经元功能的机制。方法:通络救脑注射液(Tongluo Jiunao Injection, TLJNI)作用于止常、缺血和缺血再灌三种培养状 态的大鼠CMECs,分别收集有药物干预及无干预的三对无血清内皮 细胞条件培养液，并测定其LDH值。同步原代培养大鼠脑皮质神经 元，亦分为止常、缺血、缺血再灌三组，用低(10%)、中 (50%)、高(100%)三种浓度的各类CMECs-CM分别作用上述 三种培养状态的神经元，测定其LDH漏出率。结果:比较TLJNI干 预后的CMECs-CM与无干预的CMECs-CM中LDH漏出值， CMECs缺血组与缺血再灌组经药物干预后均明显降低(P lt;0.01 ) o对于缺血神经元，缺血内皮细胞条件培养液 (conditioned medi-um of ischemic CMECs , Is-CM )高浓度 (100%)和TLJNI干预后的缺血内皮细胞条件培养液(conditioned medium of ischemic CMECs ent, IsT-CM)高浓度(100%)作用后 表现为增加LDH漏出率(P lt;0.01),而低浓度10%的IsT-CM 则降低LDH漏出率(P lt;0.05 );对于缺血再灌神经元，与对照 组比较，各类CMECs-CM作用后均能降低神经元LDH漏出率(P lt;0.05或Plt;0.01) o比较每种条件液相邻浓度间的效应差异， 均以10%或50%的CM降低损伤为佳，正常内皮细胞条件培养液 (conditioned medium of normal CMECs, N-CM)及缺血再灌内皮 细胞条件培养液(conditioned medium of ischemic/reperfusional CMECs , Rp-CM )组间羌异有统计学意义(P lt;0.05或P lt;0.01 );对于正常神经元，各类CMECs-CM作用后均增加了神 经元LDH漏出率(P lt;0.05或Plt;0.01 ) o比较每种条件液相 邻浓度间的效应差异，N?CM组间差异有统计学意义(P lt;0.05 或P lt;0.01 ) o结论:TLJNI能够防御CMECs缺血及缺血再灌的 损伤，可里通过内皮细胞介导发挥抗缺血及缺血再灌神经元损伤的 效应。提示CMECs-CM及TLJNI干预后的CMECs-CM均存在着抗 缺血再灌神经元损伤的活性物质。 【关键词】 脑微血管内皮细胞；神经元；脑缺血；大鼠；中药 近年来中药调节脑微血管内皮的研究日益受到人们的重视［1? 3］,但整体动物实验无法将内皮细胞与脑细胞分离开来进行研究， 本实验室采用大鼠大脑皮质微血管内皮细胞和神经元分离纯化培养 的方法，可使其纯度分别达到98%,是研究二者之间关系的一种可 靠的实验方法。通络救脑注射液(Tongluo Jiunao Injection , TLJNI)是 治疗 缺血性脑病的中药新药。初步实验证实，TNJNI 在缺血内皮细胞损伤状态下具有可靠的维护脑微血管内皮功能的作 用［4, 5 ］。这种对脑微血管内皮细胞(cerebral microvascular endothelial cells, CMECs)的保护作用是否启动进一步的脑保护效 应有待探知。木实验通过观察CMECs缺血损伤及通络救脑注射液 干预后的不同条件培养液(conditioned medium, CM)抗缺血神经 元损伤的效应，探讨CMECs与神经元的功能联系，并进一步阐明 通络救脑注射液的“解毒通络”作用机制，对于深化“毒损脑络” 病机［6］的生物学理论内涵具有重要意义。 1材料与方法 1.1实验材料 1.1.1动物 雄性SD大鼠18只，体质量60-80 g ,用于同一 批CMECs原代培养。新生SD大鼠(24 h内)4只，用于同一批原 代神经元培养。动物合格证号为SCXK京2002-0003，清洁级，购 自北京维通利华实验动物中心。 1.1.2药物 通络救脑注射液，批号购自内蒙古康 源药业有限公司。药物组成为梔子和三七，提取分离有效