番茄中microrna的功能个和应用分析.docx

华中农业大学2010届博士研究生学位论文摘要 华中农业大学2010届博士研究生学位论文 摘要 Micr0鼬呵A是植物生长发育和环境响应的重要调节元件。对micr0RNA加以改 造使之产生新的靶向功能，称之人工micr0RNA。人工micr0RNA在遗传学研究和植 物基因工程上有广泛的应用前景。 在植物中表达识别病毒RNA序列的人工miRNA可以结合并降解病毒RNA基 因组，从而产生对病毒的抗性。CMV病毒是一种极具侵染力的病毒，在番茄生产上 造成严重损失。本研究设计了两个人工miI矾A，分别识别CMV病毒2a／2b基因编 码区重叠部位和病毒I斟A基因组的3’非翻译区的的保守区域，并转化番茄感病品 种。表达人工miRNA的转基因番茄表现出高效的CMV抗性，并且在接种非目标病 毒弧小，和n凡CV后仍然保持对CMV病毒的稳定抗性。表明人工miRNA能够耐 受非目标病毒的干扰。将转基因接穗嫁接到发病植株上，显示出在病毒高压下持久 稳定的抗性。通过嫁接接种实验表明人工miRNA的抗病模式是细胞自主性的，不 能作为通过维管束长距离传递的抗病毒信号分子。本研究培育了两个优良的抗病毒 转基因番茄材料，并解答了人工miI斟A抗病毒的几个机理问题，为利用人工miRNA． 培育抗病毒植物提供了一个成功的案例以供参考和借鉴。 Micro时呵A调控植物多种发育过程和生理反应，包括干旱应答。本研究发现番茄 sly．m浓169受干旱诱导表达。而其4个靶基因，即3个胆翻家族基因(．蛾^弘ⅨJ／嬲) 和一个』协妒基因(＆?坦乇PJ)的表答在干旱处理时明显下降。在番茄植株中组成性表 达sly．m限169家族一个成员sly-nl诹169c导致靶基因的表达量显著下降。与非转基因对 照植株相比，转基因植株气孔开度、蒸腾速度、离体叶片失水率等显著降低，在整体 上显示更高的耐旱性。盐处理发现转基因植株对Nacl更敏感。由于MRP蛋白参与细 胞离子运输，推测slv．瑚限169通过调控气孔保卫细胞离子运输控制气孔开关。序列的 进化树分析显示J协泸J基因在种子植物中是nliRl69的一个古老靶基因，但其删A 识别位点产生的一些新的突变使得该基因在一些物种中逐渐脱离m浓169的控制。 miI矾A156是一个植物特异性的“cr0RNA，在植物发育过程中起重要调控作 用。本研究在番茄中超表达sly—miRl56后，SBP-b0X基因等靶基因在转基因组织中 的表达明显下调。转基因植株的株型、叶片、枝条、花序及果实等多个性状产生明 显变化。其中，花序结构等性状变得与妒突变体表型相似。检测发现口可基因在转 基因植株中的表达明显降低。由此推断sly．miRl56和SBP-box基因可以通过调控．S刀 基因控制植株成花过程和花序发育。 关键词：番茄，人工血RNA，抗病毒，CMv，Sly-miRl69，耐早，气孔开关， slv．miRl56，SBP-box转录因子，株形结构，花序结构 Ⅱ 番茄中IIlicro】卧iA的功能和应用研究Abs仃act 番茄中IIlicro】卧iA的功能和应用研究 Abs仃act Micro砌叮A is趾importault regIllator 0f p1觚t deVel叩ment柚d pl觚t-钮V衲ment 缅teraction．MicroRNA can be modified t0 target mw sites，t锄ed anificial microRNA． Ani6cial面croRNA is髓imponant toolin genetic study and plant biotechn0109y． EXpression of anificial nliCroRNAs(锄1iIⅢ心)c锄con向vhus rcsistanCe in plants． CMV is 0ne of most infective Vinlses and causes huge 10st in tomat0 indus奶，．Wb made 押。锄iRNA cons臼ucts；0ne鸵唱eting出e codil培sequence shared by也e 2a and 2b RNA and也e otller 0ne ta唱eting me hi曲ly conseⅣed 3’咖lated region(UTR)of Cucumber mosaic Virus(CMⅥ．The口姐sg面c tomato pl舳ts displayed e髓c咖e rcsist趾ce t0 CMV in：fection．The resis伽1ce is stable even fIacing也e耐xed infection of a n咖et Vinls，TDbacco mosaic Vinls(n聊0r