柑橘v专c合成相关酶和erf基因的克隆与表达研究.docxVIP

柑橘Vc合成相关酶和ERF基因的克隆与表达分析柑橘Vc合成相关酶和ERF基因的克隆与表达分析 柑橘Vc合成相关酶和ERF基因的克隆与表达分析 柑橘Vc合成相关酶和ERF基因的克隆与表达分析 摘要 维生素C(Vitamin C，Vc)是生物体中重要的抗氧化剂及辅酶因子，是人体健康 和植物的生长发育中必不可少的物质：ERF(Ethylene-responsive element binding factor) 是植物特有的一类转录因子，在参与植物的生长发育及调控抗逆境胁迫应答中具有 重要作用。 本研究以‘鄂柑二号’(C unshiu Marc．CV．Egan No．2)果肉为材料，克隆了柑橘Vc 合成的五个相关基因及ERF基因；并分别测定了果实生长发育过程及环剥处理后果 肉中Vc的含量及合成相关的基因表达变化，以及环剥后果肉中ERF基因的表达变 化。主要研究结果如下： 1．从柑橘果肉中克隆得到了五个Vc合成相关的基因及ERF基因的eDNA全长： GDP．甘露糖焦磷酸化酶基因(CitGM_P)，该基因包含1086 bp的ORF，编码361 个氨基酸，登录号为HQ224946；GDP．甘露糖．3’，5’．差向异构酶基因(CitGMD， 包含1134bp的ORF，编码377个氨基酸，登录号为HQ224947；磷酸二酯酶基 因(CitGGP)，登录号为HQ224948，包含1368bp的ORF，编码455个氨基酸；．L． 半乳糖．1．磷酸磷酸酶基因(CitGPP)，，包含813bp的ORF，编码270个氨基酸， 登录号为HQ224949；L．半乳糖脱氢酶基N(CitGDH)，登录号为HQ224950，包 含954 bp的ORF，编码317个氨基酸；柑橘乙烯反应元件结合因子(CitERF) eDNA全长874bp，ORF编码207个氨基酸，登录号为HM064500。这些基因的 氨基酸序列与其他植物的同一基因同源性较高，且具有各自相对保守的功能结 构域。 2． 随着果实的生长发育，纽荷尔果肉中的Vc含量逐渐上升，且基因表达结果显示 纽荷尔中CitGME，CitGGP、CitGDH及CitGLDH表达总体呈现上升趋势，与 鄂柑二号相比具有较高的转录活性，这与两个品种间Vc的含量及变化趋势一 致，橙类果肉具有较高的Vc水平可能是由于橙类具有更强的Vc合成能力。 3．对成熟期的温州蜜柑进行了不同形式的环剥处理，结果表明，大枝环剥(BG) 可提高果肉中Vc的含量，CitGME、CitGGP，CitGDH及CitGLDH的转录水平 也显著上升；而结果枝环剥(FGD)后Vc含量降低， CitGDH和CitGLDH基 因表达也明显下调，说明这些基因可能是柑橘Vc合成中的关键基因。 华中农业大学2010届硕士研究生学位论文4．BG处理后柑橘果肉中CitERF的表达呈持续上升趋势，FDG处理后其表达先下 华中农业大学2010届硕士研究生学位论文 4．BG处理后柑橘果肉中CitERF的表达呈持续上升趋势，FDG处理后其表达先下 降后上升，与环剥后TSS的变化趋势一致，说明CitERF的表达可能受果实成熟 过程中糖分积累的诱导。 关键词：柑橘；Ve：ERF；基因克隆：基因表达；环剥 n 柑橘Vc合成相关酶和ERF基因的克隆与表达分析Cloning 柑橘Vc合成相关酶和ERF基因的克隆与表达分析 Cloning and Expression Analysis of Ve Biosynthesis--related Genes and ERF in Citrus Abstract Vitamin C(vc)，as a well—known abundant antioxidant and enzymatic cofactors， plays crucial roles in maintaining human health,plant development and stress tolerance． Ethylene—responsive element binding factors(ERFs)，ale a member of the AP2／EREBP gene family of plant transcription factors．They have been found to be mainly involved in response to biotic and abiotie stresses and play a important role in plant development progresses． In the present study,five genes involved in vitamin C biosynthesis