专题二 细胞工程 动物细胞培养和核移植技术.ppt

专题二 细胞工程 常用 技术 手段 动物细胞核移植 动物细胞融合 生产单克隆抗体 动物细胞培养 动物细胞工程 （基础） 一、动物细胞培养 1.概念 从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。（动物单个细胞 多个细胞） 2.原理 细胞增殖 3.动物细胞培养过程 1.2 动物细胞培养过程 胚胎或幼龄动物的组织器官 细胞悬液 10代细胞 50代细胞 剪碎 胰蛋白酶 洗涤、稀释、分离 原代培养 用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 比老龄动物的组织细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛。分化程度越低，增殖能力越强，越容易培养。 动物细胞培养不能最终培养成生物体 细胞增殖缓慢，核型可能变化 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 贴壁生长 接触抑制 10代以内，保持正常二倍体核型 传代培养 动物组织块 剪碎 胰蛋白酶（或胶 原蛋白酶）处理 分散成单个细胞 配制成 细胞悬 浮液 原代培养 将动物组织消化后的初次培养 动物细胞培养 过程 原代培养 过程 动物组织块 剪碎 胰蛋白酶（或胶 原蛋白酶）处理 分散成单个细胞 配制成 细胞悬 浮液 原代培养 动物细胞培养 过程 传代培养 传代培养 将贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶 处理，分瓶继续培养的过程 4.动物细胞培养条件 a 无菌、无毒 消毒、灭菌 抗生素 定期更换培养液，清除代谢废物 b 营养 合成培养基：葡萄糖、氨基酸、促生长因子、 无机盐、动物血清等 c 温度和pH 36.5±0.5℃，7.2---7.4 d 气体 95%空气，5%CO2 生产有价值的生物制品（如病毒疫 苗、干扰素、单克隆抗体） 培养基因工程的受体细胞 检测有毒物质 用于生理、病理、药理等研究 动物细胞培养 应用 植物组织培养和动物细胞培养的比较 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 培养基性质 培养基成分 培养结果 培养目的 固体培养基 各种营养物质 植物激素 植物体 快速繁殖、培育 无病毒植株等 细胞群体 各种营养物质 动物血清 液体培养基 获得细胞或 细胞产物 细胞全能性 细胞增殖 问题讨论 1、某植物非常具有观赏价值，你采取什么方法来繁殖后代，使它们继承该植物的全部优良性状？ ２、1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达的奶牛，年产奶量为30.8t，创造了世界奶牛产量的最高记录。目前世界各国高产牛奶场的奶牛，平均每年产量为十几吨，而我国平均水平仅有3－4吨。你能想办法繁殖卢辛达的后代，使年产奶量为30.8t吗？ 1、什么是克隆? 2、以前学习过动物克隆的实例吗？ 3、请简述多莉克隆的过程？ 多莉羊 动物体细胞核移植技术和克隆 就是无性繁殖，具体的说，是指从一个共同的祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子、细胞或个体。 卵细胞 苏格兰黑面母羊 芬兰白面母羊 乳腺细胞 细胞质 细胞核 细胞核移植 早期胚胎 另一头母绵羊子宫 胚胎移植 多莉羊 多莉羊的培育过程 重组细胞 动物体细胞核移植和克隆技术 动物体细胞核移植概念: 1、概念： 将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物 核移植 胚胎细胞核移植 体细胞核移植：（难度高） 受体细胞：MⅡ期的卵母细胞 2、分类： 3、体细胞核移植过程 具优良性状的供体母牛 获取卵母细胞 供体细胞培养 MⅡ中期卵母细胞 卵母细胞去核 供体核进入受体卵母细胞 重组胚胎 代孕母牛 生出与供体遗传物质基本相同的个体 获取供体细胞 融合 4.体细胞核移植技术的应用前景 1）改良动物品种 2）保护濒危动物 3）克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 4）异种移植的供体，用于组织器官的移植 5）深入了解胚胎发育及衰老过程 6）追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病 5.体细胞核移植技术存在的问题： 成功率非常低 绝大多数克隆动物存在健康问题 对克隆动物食品的安全性问题也存在争议 思考题 1、在进行体细胞核移植之前，为何要去掉受体卵母细胞的核？ 卵母细胞的细胞质可使体细胞核的全能性得以表达； 卵母细胞体积比较大，容易操作； 卵母细胞的细胞质多，营养丰富，能为