临床微生物学检验-细菌生化反应.ppt

* * （三）碳源和氮源利用试验 枸橼酸盐利用试验 应用：用于肠杆菌科中菌属间的鉴定。 原理：有些细菌能利用枸橼酸盐作为唯一的碳源获得能量也能利用铵盐作为唯一的氮源，同时生成氨，使培养基碱化。 结果：指示剂为溴麝香草酚兰 * * （＋） （－） 枸橼酸盐利用试验 （－） （＋） 细胞色素氧化酶参与的细菌呼吸途径中电子传递 1.氧化酶试验（Cytochrome oxidase test） （四）呼吸酶类试验 细胞色素C 细胞色素氧化酶 氧化的细胞色素C 二甲基对苯二胺（还原） 四甲基对苯二胺（还原） 无色 无色 二甲基对苯二胺（氧化） 四甲基对苯二胺（氧化） 红色 蓝色 应用：主要用于肠杆菌科细菌与假单胞菌的鉴别。 间接法 直接法 氧化酶试验（Cytochrome oxidase test）结果 试管法 玻片法 2.过氧化氢酶（触酶）试验( Catalase test) 应用：用于革兰阳性球菌的初步分群。 触酶 H2O2 H2O 出现气泡 + O2 3.硝酸盐还原试验(Nitrate reduction test)原理 对氨基苯磺酸 ?-萘胺 ?-萘胺偶氮苯磺酸 亚硝酸 * * 原理：有些菌可还原硝酸盐为亚硝酸盐或氨和氮等，前者与醋酸反应生成亚硝酸，亚硝酸可与?-萘胺和对氨基苯磺酸反应，生成红色偶氮化合物。硝酸盐还原试验就是测定还原过程中所产生的亚硝酸盐。 结果：加试剂后立即出现红色为阳性；若没有红色出现，结果可能为：①真正阴性，可加锌粉于阴性反应物中，变成红色，为真正阴性；②假阴性（真阳性），加锌粉不变色，因生成的亚硝酸盐被进一步还原成NH3、N2 等。 锌 硝酸盐 亚硝酸盐 硝酸盐没有被还原 硝酸盐还原试验(几种结果演示) 硝酸盐培养基（接种细菌并培养） 变红 不变红色 硝酸盐 亚硝酸盐 硝酸盐 氨+氮 +试剂（对氨基苯磺酸、 ?-萘胺、醋酸） Zn 变红 不变红色（ ） 硝酸盐 亚硝酸盐 Zn 本试验在细菌鉴定中广泛应用。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、嗜麦芽假单胞菌等非发酵菌可还原硝酸盐产生氮气。 + + - * * 1． DNA酶试验 在革兰阳性球菌中只有金黄色葡萄球菌产生DNA酶，在肠杆菌科中沙雷氏菌产生此酶。 （五）其他生化试验 * * DNA酶试验原理： DNA酶 长链DNA 寡核苷酸链（可被酸沉淀：白色） （可溶于酸：透明） 试剂：1%盐酸 2.血浆凝固酶试验 作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标，也是葡萄球菌鉴别时常用的一个试验。 致病性葡萄球菌具有两种凝固酶: 结合凝固酶（结合在金黄色葡萄球菌细胞壁上） 游离凝固酶（作用类似凝血酶原，激活后可使血浆凝固） 纤维蛋白原 纤维蛋白 凝固酶 血浆 液态 凝固 （－） （＋） （－） （＋） （Coagulase test） 玻片法 试管法 * * 3． CAMP试验 在链球菌中，只有B群 链球菌产生CAMP因子，可促进葡萄球菌产生的beta-溶血素溶解红细胞的能力。 金黄色葡萄球菌 4.胆汁溶菌试验 原理：某些细菌能产生自溶酶使细菌溶解，而胆汁能激活自溶酶加快细菌溶解。 应用：肺炎链球菌的鉴定 5.卵磷脂酶试验 原理：有的细菌产生卵磷脂酶 (α-毒素)，在钙离子存在时， 此酶可迅速分解卵磷脂，生成 浑浊沉淀状的甘油酯和水溶性 磷酸胆碱 应用：主要用于厌氧菌鉴定。 被检菌划线接种或点种于卵黄琼脂平板上，于35℃培养3--6h * * （1）O/129抑菌试验 用于弧菌科的属间鉴别，弧菌属、邻单胞菌属 对O/129敏感，而气单胞菌属耐药。 （2）杆菌肽试验 用于A群链球菌与非A群链球群的鉴别（抑菌圈直径≥10mm敏感） （3）奥普托欣（Optochin）试验 主要用于肺炎链球菌与其他链球菌的鉴别（抑菌圈≥14mm为敏感）。 6.常见抑菌试验 肺炎链球菌对optochin敏感 （抑菌圈≥14mm) A群链球菌对杆菌肽敏感 （抑菌圈≥10mm) * * 7. 复 合 生 化 试 验 * 克氏双糖铁培养基 ②分解葡萄糖+乳糖 产酸(乳糖多，产酸多） 斜面和底层均变黄 (Kligler Iron Agar,KIA) 组成：无糖培养基+1份葡萄糖+10份乳糖 + 铁盐 + 酚红 营养