肝癌组织高迁移率族蛋白B1 HMGB1 的表达及其与临床病理因素的关系.docxVIP

肝癌组织高迁移率族蛋白Bl （HMGB1）的表达及其与临床病理因素的关系 庄利萍（通讯作者）于璐杨倩范方淑季语祝刘瑛瑛3 （1昆明市第一人民医院 病理科 云南昆明650031） 四川省绵阳市屮心医院病理科 四川绵阳621000 复旦大学病理生理教研室上海200433） 【摘要】目的 探讨HMGB1蛋白在原发性肝细胞癌屮的表达及对原发性肝细胞 癌的诊断价值。方法应用免疫组化及计算机图像分析方法测定30例原发性肝 细胞癌及癌旁组织标本（自身配对组织）HMGB1蛋白表达，及其与原发性肝细 胞癌临床病理因素的关系。结果HMGB1在肝癌组织呈过表达，其表达高于肝 癌旁组织（PV0.05）； HMGB1在包膜不完整、有淋巴结转移肝癌屮的表达分别 高于包膜完整及无淋巴结转移者（均P0.05）,随着Edmondson病理学分级增 加，HMGB1表达增高（P0.05）o而HMGB1表达与肿瘤患者年龄、性别、肿瘤 大小无明显相关（均P0.05）o结论HMGB1可能在原发性肝细胞癌的发生、 发展，浸润及转移屮发挥重要的作用。HMGB1可能是原发性肝细胞癌的一种新 的潜在的肿瘤特异性标志物。 【关键词】肝细胞癌 HMGB1免疫组织化学 计算机图像分析 【屮图分类号1R363.1 【文献标识码1A 【文章编号12095-1752（2012 ） 02-0127-02 高迁移率族蛋口 Bl （high-mobility group box-Bl^MGBl）是高度保守的 非组蛋A DNA结合蛋片，哺乳动物屮HMGB1具有99%的同源性质，HMGB1作 为一种核蛋白，在DNA结构、基因转录、重组、细胞存活等方面发挥重要的调 控作用［1,2］o最新研究发现HMGB1与原发性肝细胞癌有关，由于其在原发性肝 细胞癌屮的表达特异性升高而引起研究者［3?5］的注意。因此我们采用免疫组织化 学及计算机图像分析技术方法分析HMGB1蛋白在原发性肝细胞癌中的表达及与 其临床病理因素的关系，为进一步探讨HMGB1与原发性肝细胞癌的发生、发展， 浸润、转移的关系，寻找新的生物学标记物及治疗靶点奠定基础。 一、 一般资料 材料：标本来自2008年1月?2011年3月昆明市第一人民医院肝胆外 科的原发性肝癌患者，以距癌灶边缘5cm为分界分别留取肝癌癌灶组织，非癌 组织各30例。其中男24例，女6例,年龄36-75岁,平均年龄59.6plusmn;10.5。 瘤体＜5 cm 16例，瘤体ge;5 cml4例，所有标本均经病理组织学证实为原发性 肝细胞肝癌。 二、 方法 1 ?免疫组织化学法 兔抗人HMGB1多克隆抗体及S-P免疫组化试剂盒分别购自美国PTG公 司，北京中杉金桥生物技术有限公司。肝癌及癌旁组织免疫组化以经典的S?P法 进行（HMGB1工作浓度1： 100,每片滴加HMGB1 —抗，4°C冰箱过夜）DAB显 色，以PBS液代替一抗作为阴性对照，以已证实HMGB1染色阳性的肝癌标本作 阳性对照。 2?计算机图像分析应用HPIAS—1000高清晰度病理图文分析系统对 免疫组化结果进行定量分析。（详细操作步骤参照HPIAS—1000型图像分析仪使 用手册。） 3.结果判断： （1） 免疫组化 细胞核和/或细胞浆出现棕黄色或棕褐色染色颗粒性细 胞。每张切片在高倍镜下（X200）随机观察5个视野，计数200个细胞/视野， 阳性细胞数＜15%为表达阴性（?）,阳性细胞数15%-50%为表达弱阳性（ + ）,阳 性细胞数51%-75%为表达中等强度阳性（++）,阳性细胞数＞75%为表达强阳性 （+卄），其中阳性细胞数大于50%为过表达。 （2） 计算机图像分析 每组标本均在400times;放大倍数下按照无偏 采样原则取5个视野，每个视野均按照无偏采样原则取5个细胞进行测定。根据 阳性单位（PU）结果来判断免疫组化染色强度的差异。PU值用均值+标准差（）表示。 4 ?统计学分析 应用SPSS13.0统计软件分析处理。多样本和两样本半定量积分的阳性 表达比较均采用Kruskal-Wallis秩和检验，蛋白表达强度差异PU值（x-plusmn;S） 进行单因素方差分析后行LSD?t检验。（检验水准a二0.05, P0.05具有统计学意 义。） 三、结果 1?免疫组化染色 癌旁组织中HMGB1蛋白表达较低，表现为少数胞核 和（或）胞浆微弱着色。HMGB1蛋片在肝癌组织中呈过表达，阳性颗粒主要位 于细胞核中，细胞浆也有微弱着色（图1?4）。肝细胞癌组织中HMGB1阳性表 达率为80%,与癌旁组织30%相比，差异有统计学意义（PV0.05）。肝细胞癌组 织I、II-IIL IV级中HMGB1蛋白阳性表达率逐渐增加,分别为62.5%、83%、 90%,（均PV0.05）。随着肝细胞癌淋巴结的转