乳与乳制品常规理化指标检验乳糖蔗糖和总糖的检测.doc

乳与乳制品常规理化指标检验乳糖蔗糖和总糖的检测 YLNB 2.7 一、高压液相色谱法( 仲裁法) 1. 原理 食品中的多种糖，可利用高压液相色谱法的μ－碳水化合物柱或氨基柱将它们分离，用示差折光检测器，检出各糖液的折光指数，此折光指数与其浓度成正比。 2. 试剂 所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。 2.1澄清剂：硫酸铜，质量分数7%。氢氧化钠，质量分数4%。 2.2乙腈。 2.3标准溶液 2.3.1标准糖贮备液，10mg/ml。 精确称取被测糖的标样1g，溶于水中，用水稀释至100ml容量瓶内，定容。 2.3.2标准糖工作液，4 mg/ml。 吸取4ml贮备液，置10ml容量瓶中，用乙腈稀释至刻度。 3. 仪器 高压液相色谱仪，带碳水化合物分析柱或氨基柱。 4. 方法 4.1 样液制备 精确称取2g左右奶粉或15g左右液态奶样品，加30ml水溶解，移至100ml容量瓶中，加澄清剂硫酸铜（4.1）10ml，氢氧化钠（4.1）4ml，振摇，加水至刻度，静置半小时，过滤。取4ml样品母液置10ml容量瓶用乙腈定容，通过0.45um过滤器过滤，滤液备用。 4.2 高压液相色谱仪工作条件： 示差折光检测器：氨基柱 流动相：乙腈/水=6/4 流动相流速：1.0ml/min 4.3 进样 在仪器稳定后，用注射器或进样阀注射50uL标准样液共4次，记下保留时间，测定峰高，放弃第一次数据，取后三者平均峰高值，同样注射样品50ul四次得出平均峰高。 结果计算 样品中糖含量（g/100g）= （1） 式中： C1— 标准糖溶液浓度，mg/ml； H— 样品中糖的平均峰高； H1— 标准糖溶液的峰高； m — 样品的质量，g 。 注：如果需同时测定样品中所含其他糖类，可在标准糖溶液中加入各种糖1g，进样如前，记下各种糖保留时间，按上列公式计算各值。 6. 允许差 同一样品两次测定值之差不得超过两次测定平均值的5%。 方法二 乳糖、蔗糖和总糖的测定（莱因—埃农氏法） 1．方法提要 乳糖：样品经除去蛋白以后，在加热条件下，直接滴定已标定过的费林氏液，样液中的乳糖将费林氏液中的二价铜还原为氧化亚铜。以次甲基蓝为指示剂，在终点稍过量时，乳糖将蓝色的氧化型次甲基蓝还原为无色的还原型次甲基蓝。根据样液消耗的体积，计算乳糖含量。 蔗糖：样品除去蛋白质后，其中蔗糖经盐酸水解转化为具有还原能力的葡萄糖和果糖，再按还原糖测定。将水解前后转化糖的差值乘以相应的系数即为蔗糖含量。 总糖：乳糖和蔗糖之和。 2. 试剂 所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；实验室用水，如未注明其他要求，均指三级水。 2.1费林氏液（甲液和乙液） 2.1.1甲液：取34.639g硫酸铜，溶于水中，加入0.5ml浓硫酸，加水至500ml。 2.1.2乙液：取173g酒石酸钾钠及50g氢氧化钠溶解于水中，稀释至500ml，静置两天过滤。 2.2次甲基蓝溶液：10g/L。 2.3盐酸溶液：体积比1：1。 2.4酚酞溶液：0.5g酚酞溶于75ml体积分数95%的乙醇中，并加入20ml水，然后再加入约0.1mol/L的氢氧化钠溶液，直到加入一滴立即变成粉红色，再加入水定容至100ml。 2.5氢氧化钠：c（NaOH）为300g/L。取300g氢氧化钠，溶于1000 ml水中。 2.6乙酸铅溶液：c（PbAc2）为200g/L。取20g乙酸铅，溶解与100 ml水中。 2.7草酸钾—磷酸氢二钠溶液：取草酸钾3g，磷酸氢二钠7g，溶解于100mL水中。 3. 仪器 常用理化实验室仪器。 4. 方法及结果计算 4.1费林氏液的标定 4.1.1用乳糖标定 4.1.1.1称取预先在92～94℃烘箱中干燥2h的乳糖标样约0.75g（准确到0.2mg），用水溶解并稀释至250ml。将此乳糖溶液注入一个50ml滴定管中，待滴定。 4.1.1.2预滴定：取10ml费林氏液（甲、乙液各5ml）于250ml三角烧瓶中。再加入20ml蒸馏水，从滴定管中放出15ml乳糖溶液于三角瓶中，置于电炉上加热，使其在2min内沸腾，沸腾后关小火焰，保持沸腾状态15s，加入3滴次甲基蓝溶液（2.2），继续滴入乳糖溶液至蓝色完全褪尽为止，读取所用乳糖的毫升数。 4.1.1.3精确滴定：另取10ml费林氏液（甲、乙液各5ml）于250ml三角烧瓶中，再加入20ml蒸馏水，一次加入比预备滴定量少0.5～1.0ml的乳糖溶液置于电炉上，使其在2min内沸腾，沸腾后关小火焰，保持沸腾状态2min, 加入3滴次甲基蓝溶液（2.2），继续滴入乳糖溶液(一滴一滴徐徐滴入)，待蓝色完全褪尽即为终点。以此滴定量作为计算的依据（在同时测定蔗糖时，此即为转化前