乳与乳制品非常规理化指标检验山梨酸苯甲酸糖精钠的检测.doc

乳与乳制品非常规理化指标检验山梨酸苯甲酸糖精钠的检测 YLNB 5.11 1.　原理 　　样品沉淀脂肪和蛋白质，调pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。2.　试剂　　方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度水，溶液为水溶液。2.1　甲醇：经滤膜(0.45μm)过滤。2.2　稀氨水(1＋1)：氨水加水等体积混合。2.3　乙酸铵溶液(0.02mol/L)：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经滤膜(0.45μm)过滤。2.4糖精钠标准储备溶液：准确称取0.0851g经120℃烘干4h后的糖精钠，加水溶解定容至100ml糖精钠含量1.0mg/ml，作为储备溶液。 2.5　碳酸氢钠溶液(20g/L)：称取2g碳酸氢钠(优级纯)，加水至100mL，振摇溶解。2.6　苯甲酸标准储备溶液：准确称取0.1000g苯甲酸，加碳酸氢钠溶液(20g/L)5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，苯甲酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。2.7　山梨酸标准储备溶液：准确称取0.1000g山梨酸，加碳酸氢钠溶液(20g/L)5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，山梨酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。2.8　苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准混合使用溶液：取苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准储备溶液各1.0mL，放入100mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液含苯甲酸、山梨酸、糖精钠各10ug/mL。经滤膜(0.45μm)过滤 2.9草酸钾—磷酸氢二钠溶液：取草酸钾3g，磷酸氢二钠7g，溶解于100mL水中。 2.10乙酸铅溶液：c（PbAc2）为200g/L。取20g乙酸铅，溶解与100 ml水中。3. 仪器　　高效液相色谱仪(带紫外检测器)。4.　方法4.1　样品处理4.1.1　汽水：称取5.00～10.0g样品，放入小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水(1＋1)调pH约7。加水定容至10～20mL，经滤膜(0.45μm)过滤。4.1.2　果汁类：称取5.00～10.0g样品，用氨水(1＋1)调pH约7，加水定容至适当体积，离心沉淀，上清液经滤膜(0.45μm)过滤。 4.1.3　配制酒类：称取10.0g样品，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水(1＋1)调pH约7，加水定容至适当体积，经滤膜(0.45μm)过滤。 4.1.4 发酵酸奶：称取大约15g酸奶，放入小烧杯中，用15ml水洗入50ml容量瓶中，加乙酸铅和草酸钾磷酸氢二钠各4ml，每次加入试剂时都要徐徐加入，并摇动容量瓶，用水稀释至刻度。静止数分钟，用干燥滤纸过滤，滤液用氨水(1＋1)调pH约7，经滤膜(0.45μm)过滤，备用。4.2　高效液相色谱参考条件4.2.1　色谱柱：YWG－C18 4.6mm×250mm不锈钢柱或同等性能的柱子。4.2.2　流动相：甲醇：乙酸铵溶液(0.02mol/L)(5：95)（根据情况可以调整）。 4.2.3　流速：1mL/min。4.2.4　进样量：20μL。4.2.5　检测器：紫外检测器，波长230nm。　　根据保留时间定性，外标峰面积法定量。5. 结果计算 X = 　　式中：X——样品的含量，mg/kg；　　C ——标准使用液浓度，ug/ml；　　V1——样品稀释液总体积，mL；　 m ——样品质量，g ； A样--- 样品的峰面积 ； A标----标样的峰面积 。　　结果的表述：报告算术平均值的三位有效数。6. 允许差：相对相差≤10%。 7. 色谱图