【全程方略】高中生物 专题1 基因工程1.2基因工程的基本操作程序精讲导学名师优质课件 新人教版选修3.pptVIP

【典例训练2】(2013·聊城高二检测)下列关于基因表达载体的构建描述错误的是(　　) A.基因表达载体的构建是基因工程的核心 B.基因表达载体的构建包括目的基因、启动子、终止子、标记基因等部分 C.目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因 D.构建的基因表达载体都是相同的 【解题关键】解答本题的关键是明确以下两点: (1)基因表达载体的组成; (2)构建基因表达载体的目的、方法。 【解析】选D。基因表达载体的构建是基因工程的第二步,也是基因工程的核心;一个基因表达载体的组成除目的基因外还必须具有启动子、终止子、标记基因等部分;目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因;由于受体细胞不同,基因表达载体的构建也会有差别,不可能都是相同的。 三、目的基因导入受体细胞 1.目的基因导入受体细胞的过程: 2.目的基因导入受体细胞的常用方法: 受体细 胞种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法 显微注射法 Ca2+处理法 受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 转化过程 目的基因插入Ti质粒的T-DNA上→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA上→表达 目的基因表达载体的提纯→取卵→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2+处理细胞→感受态细胞,表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 【思维拓展】(1)目的基因导入受体细胞后不一定都能够维持稳定和遗传: 目的基因能否在植株细胞内稳定保存并表达的关键是目的基因是否插入到受体细胞染色体上的DNA中。图中过程b与过程a相比,b会使目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达,而a细胞分裂时,细胞质是不均分的,子细胞不一定含有目的基因。 (2)Ca2+促进转化的原因: Ca2+(或CaCl2溶液)对微生物细胞的作用是增加细胞壁的通透性。 【典例训练3】农杆菌是一种在土壤中生活的微生物,能在自然条件下感染植物,因而在植物基因工程中得到了广泛的运用。下图为农杆菌转化法的示意图,试回答下列问题: (1)一般情况下农杆菌不能感染的植物是　　　　　,利用农杆菌自然条件下感染植物的特点,能实现　　　　　。具体原理是在农杆菌的Ti质粒上存在T-DNA片段,它具有可转移至受体细胞并整合到受体细胞　　　　　　上的特点,因此只要将携带外源基因的DNA片段插入到　　　　　　(部位)即可。 (2)根据T-DNA这一转移特点,推测该DNA片段上可能含有控制 　　　　　　(酶)合成的基因。 (3)图中c过程中,能促进农杆菌向植物细胞转移的物质是 　　　　　类化合物。 (4)植物基因工程中除了农杆菌转化法之外,还可采取_______ __________________________________。(至少写出两种) 【解题关键】解答本题的关键有: (1)分析农杆菌能感染双子叶植物和裸子植物的本质; (2)分析农杆菌中Ti质粒中的T-DNA特点及其整合到染色体DNA的实质。 【解析】(1)一般农杆菌不能感染的植物是单子叶植物,可感染双子叶植物和裸子植物。利用其感染性,可实现目的基因导入植物细胞。真正可转移至受体细胞并整合到受体细胞染色体的DNA上的是农杆菌T-DNA片段,因此目的基因必须插入到该部位才能成功。(2)根据T-DNA这一转移特点,可以推测该DNA片段能控制合成DNA连接酶、限制酶以实现与双子叶植物细胞染色体DNA的整合。(3)植物细胞受伤后可产生酚类物质,促进农杆菌向植物细胞转移。(4)植物基因工程中除了农杆菌转化法之外,还有基因枪法和花粉管通道法等。 答案:(1)单子叶植物　目的基因导入植物细胞 染色体的DNA　T-DNA片段(内部) (2)DNA连接酶、限制酶 (3)酚 (4)基因枪法、花粉管通道法 【互动探究】 (1)怎样操作能使农杆菌感染单子叶植物? 提示:可在单子叶植物受损处涂加酚类物质来吸引农杆菌。 (2)根据题干分析,为什么动植物病毒也可作为基因工程的载体? 提示:病毒能够侵染正常细胞,有的病毒还能将自己的核酸整合到宿主细胞的染色体上,所以可以作为基因工程的载体。 四、目的基因的检测与鉴定 1.操作目的: 检测和鉴定目的基因导入受体细胞后,是否可以稳定维持和表达其遗传特性是基因工程最为关键的一步。 2.目的基因检测与鉴定的方法比较: 类型 步骤 检测内容 方法 判断指标 分 子 检 测 第一步 目的基因是否导入受体细胞 DNA分子杂交技术(DNA与DNA之间) 是否显示出杂交带 第二步 目的基因是否转录出mRNA 分子杂交技术(DNA与mRNA之间) 第三步 目的基因是否翻译成蛋白质 抗原—抗体杂交 个体生物学水平的鉴定 植物可进行抗虫或抗病的接种实验,以确定是否有抗性以及抗性程度;基因工程产品可与天然产品的功能进行活性比较,以确定转基因产品功能活性是否与天然产品相同 【易