第5章 核酸类--脂类药物.ppt

第五章 核酸类药物 第一节 概述 （二）提取与纯化 （三）含量测定 二、DNA的制备 三、核苷酸、核苷及碱基的制备 光合磷酸化法制备ATP的工艺流程 ATP的药理作用与临床应用 第五章 酶类药物 第一节 概述 对酶类药物的要求 二、酶的分子组成及分类 2. 酶的分类 三、酶类药物的临床应用 第二节 酶类药物的一般制备方法 一、酶的原材料选择与预处理 （二）原材料的预处理 三、酶的纯化 （三）酶的结晶 四、酶活力的测定与纯度检验 五、菠萝蛋白酶 （三）检验方法 第七章 多糖类药物 多糖的药理作用 第二节 糖类药物的一般制备技术 二、多糖的分离与纯化 （三）多糖药物的鉴定检测方法 2.鉴别 第三节 香菇多糖 二、生产工艺 三、质量检测 第八章 脂 类 药 物 二、脂类药物的分离 第三节 发酵工程生产脂类药物 微生物生产脂类的优点 第四节 大豆磷脂 二、生产工艺 本 章 结 束！ 超临界流体（supercritical fluid, SF） 是指某种气体（液体）或气体（液体）混合物在操作压力和温度均高于临界点时，使其密度接近液体，而其扩散系数和黏度均接近气体，其性质介于气体和液体之间的流体。 超临界流体萃取法（supercritical fluid extraction, SFE）技术就是利用超临界流体为溶剂，从固体或液体中萃取出某些有效组分，并进行分离的一种技术。 　　 超临界流体萃取法的特点在于充分利用超临界流体兼有气、液两重性的特点，在临界点附近，超临界流体对组分的溶解能力随体系的压力和温度发生连续变化，从而可方便的调节组分的溶解度和溶剂的选择性。 三、脂类药物的精制 经分离后的脂类中常有微量杂质，需用适当的方法精制，常用的有结晶法、重结晶法和有机溶剂沉淀法。 发酵工程生产脂类药物是利用微生物在最适宜条件下把糖等底物转化成脂类化合物的现代生物技术。 碳水化合物 ↓ 柠檬酸 苹果酸 丙酮酸 PK ↓ PFK ↓ 葡萄糖 ↓ 丙酮酸 乙酰辅酶A 草酰乙酸 苹果酸 草酰乙酸 乙酰辅酶A 丙二酸单酰辅酶A 脂酰辅酶A 甘油三酯 柠檬酸 异柠檬酸 α-酮戊二酸 继续TCA循环 线粒体膜 TCA循环 EMP途径 ACC FAS PD PC CS 线粒体膜 细胞质 1. 活力测定 无论在酶的抽提纯化过程中或是对酶的性质进行研究过程中为了了解所选择方法是否适宜，几乎每一步骤前后都应进行酶的活力测定，做出总活力和比活力的比较。 2.纯度检测 在酶的分离提纯中，总活力用于计算某一抽提或纯化步骤后酶的回收率（Y），而比活力则用于计算某一纯化步骤的效果，即纯度的提高（E），其关系如下： Y=某步骤后的总活力/某步骤前的总活力 E=某步骤后的比活力/某步骤前的比活力 是从菠萝汁或加工菠萝削下的废皮中提取的一种蛋白水解酶，粗菠萝水解酶是各种成分的混合物，除蛋白水解酶系外，还含有磷酸酯酶、过氧化物酶、纤维素酶、其它糖苷酶及非蛋白物质。 实验证明，菠萝蛋白酶具有消炎抗水肿作用，作用特点是能选择性水解纤维蛋白，对与凝血有关的纤维蛋白原仅有微弱的作用，不影响正常血液的凝固。能分解肌纤维，可单独或与胰蛋白酶制成合剂使用，消除各种单纯性炎症、水肿、血肿，促进抗生素和化疗药物的渗透和扩散。 临床适用于治疗支气管哮喘、急性肺炎、产后乳房充血、乳腺炎、产后血栓静脉炎、视网膜炎等。试用于同抗生素配伍治疗关节炎、关节周围炎、蜂窝组织炎和小腿溃疡等。 （一）化学性质和组成 白色至浅棕黄色无定形粉末。略溶于水，水溶液无色至淡黄色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚，为一种巯基酶。半胱氨酸能激活酶的活性，但受重金属抑制。最适pH7.0，相对分子量33000。 主要作用原理：使多肽类水解为低分子量的肽类。 （二）生产工艺（白陶土吸附法） （吸附） 白陶土 10℃ 菠萝蛋白酶成品 湿菠萝蛋白酶精制品 澄清液 粗制品 （沉淀） HCl pH4 （溶解） 自来水， NaOH 洗脱液 （盐析、抽滤） HCl，（NH4）2SO4 pH=4.5～5 吸附物 （洗脱） Na2CO3或NaOH （NH4）2SO4 pH=6.5～7 压出液 菠萝皮 （压榨） 苯甲酸钠 （干燥、粉碎） pH7～7.5 1. 性状 富有菠萝香气，浅黄色或浅棕黄色粉末。 2. 蛋白酶水解活力测定 （1）原理 菠萝蛋白酶在一定温度与pH条件下，水解酪蛋白底物，然后加入三氯乙酸终止酶反应，并沉淀除去未水解的蛋白，滤液对紫外光有吸收，用紫外分光光度计法测定，根据吸光度计算酶活力。 （2）酶活力单位定义 在测定条件