红冬孢酵母Δ12－脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达.pdfVIP

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2020-01-30 发布于辽宁
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红冬孢酵母Δ12－脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达.pdf

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云南大学学报（自然科学版），２０１６，３８（４）：６６９～６７５ＤＯＩ：１０．７５４０／ｊ．ｙｎｕＪｏｕｒｎａｌｏｆＹｕｎｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ１２ ∗ －红冬孢酵母Δ 脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达罗敏周，杨晓霞，季秀玲，林连兵，魏云林，张　琦（昆明理工大学生命科学与技术学院生物工程研究中心，云南昆明　６５０５００）１２１２－－摘要：Δ 脂肪酸脱氢酶是多不饱和脂肪酸合成的关键酶．参考已知的Δ 脂肪酸脱氢酶基因序列设计特异性引物，通过ＰＣＲ扩增从红冬孢酵母ＹＭ２５２３５中获得了全长为１３４１ｂｐ的一个ｃＤＮＡ序列．序列分析表明，１２该序列具有一个编码４４６个氨基酸、相对分子质量为５０．６ｋｕ的完整开放阅读框，所编码的氨基酸序列与Δ －１２－脂肪酸脱氢酶相似性最高但并不相同，而且也具有Δ 脂肪酸脱氢酶特异性的３个组氨酸保守区，表明该序１２－列为一个新的编码Δ 脂肪酸脱氢酶的基因．为了验证功能，将该基因序列克隆到表达载体ｐＹＥＳ３／ＣＴ中，构建重组质粒ｐＹ３ＲＫＤ１２，并转化到酿酒酵母的缺陷型菌株ＩＮＶＳＣＩ中进行异源表达．通过脂肪酸气相色谱（ＧＣ）分析表明，在ｐＹ３ＲＫＤ１２转化的酵母细胞总脂肪酸中出现一个保留时间和亚油酸甲酯标准品相同的新峰，其含量占酵母总脂肪酸的３．７６％，但在ｐＹＥＳ３／ＣＴ转化的酵母细胞总脂肪酸中没有检测到．这些结果证明所克隆的１２－序列是一个新的Δ 脂肪酸脱氢酶基因，其表达的蛋白质可催化油酸合成亚油酸．１２－关键词：红冬孢酵母；Δ 脂肪酸脱氢酶，亚油酸，克隆和表达－－－中图分类号：Ｑ９３３　　文献标志码：Ａ　　文章编号：０２５８７９７１（２０１６）０４０６６９０７１２－　　多不饱和脂肪酸（Ｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｆａｔｔｙａｃｉｄｓ，ｃｙｓｔｉｓｓｐ．）ＰＣＣ６８０３