T淋巴细胞亚群检测操作程序PDF打印版.pdfVIP

学 海 无 涯 一、目的： 保证流式细胞仪检测外周血中 T 淋巴细胞亚群检验的工作质量，旨在保证 正确的T 淋巴细胞亚群检测标准操作程序和控制检测结果的精确度与准确度。 二、修改程序： 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下 述人员批准签字：质量主管、授权人（科主任），方可改动。 三、适用范围： 外周血中T 淋巴细胞亚群的绝对计数检测。 四、实验原理： 人的T 淋巴细胞根据其生物功能和细胞表面抗原的表达可分为二大类：辅助 /诱导T 细胞和抑制/细胞毒T 细胞。辅助/诱导T 淋巴细胞表达CD3 和CD4；抑 制/细胞毒T 细胞表达CD3 和CD8。利用各种单克隆抗体与淋巴细胞表面抗原结 合，再配多色荧光染料以及绝对计数管，即可以把T 淋巴细胞区分为两种亚型， 进面得到各亚群的绝对值。 六、主要试剂： CD4-FITC ／CD8-PE ／CD3-APC ／CD45-PC7 (美国BCs 公司；CAT: IM3548)， 七、实验操作： 1、标本采集：使用EDTA-K 抗凝真空采血管，抽取静脉血2ml。 2 2、染色和固定细胞： （1） 标本管编号A，取一只流式专用管A1。 （2） A1 管加入CD4-FITC ／CD8-PE ／CD3-APC ／CD45-PC7 20ul。 （3） A1 管中再加入全血100ul，混均。 （4） 置室温，避光孵育 15min。 （5） 加入FACSLysing 溶血液2.0ml，置室温，避光孵育10min。 （6） 300g 离心5min，弃上清液。 （7） PBS 洗涤细胞两次，300g 离心5min，弃上清液。 3、上机检测；分析结果；打印实验报告。 八、参考值： 总T 细胞（CD3+）： 59.4-84.6 辅助/诱导T 细胞(CD3+CD4+): 28.5-60.5 1 学 海 无 涯 抑制/细胞毒T 细胞(CD3+CD8+): 11.1-38.3 Th/Ts: 0.9-3.6 九、临床意义： T 淋巴细胞可以分为辅助/诱导T 细胞和抑制/细胞毒T 细胞。测定CD4 和CD8 可用于化疗、自身免疫病的免疫监视。在造血干细胞移植患者中， CD4+细胞恢复晚于CD8+细胞，导致Th/Ts 比例显著下降。HIV 及某些病毒 感染（EB 病毒、SARS 病毒等）患者Th/Ts 比例也下降显著。 十、质量控制： 1、先用标准微球调整仪器，正确设置电压、补偿。 2、健康人CD4+细胞加CD8+细胞总数应大约等于CD3 总数；免疫病、淋巴 瘤可能有较大差异。 3、收集细胞太少（少于500 个）、碎片污染太多（超过10%）、门中淋巴细 胞不纯（小于90%）可能引起实验结果不正确。 4、建议使用逻辑设门方法（CD45-SSC 设门与FSC-SSC 设门）减少杂质的干 干扰。 授 权 人 质 量 主 管 操 作 人 员 生 效 日 期 2