2019年转基因及基因敲除.pptVIP

转基因与敲除技术 飞鱼 2011-12-5 转基因技术 1 ? 定义与原理 ? 常用方法 ? 研究前景与运用 定义 ? 转基因技术：将人工分离和修饰过的基因导入到生物体基 因组中，由于导入基因的表达，引起生物体的 性状的可遗 传的变化 ，这一技术称之为转基因技术（ Transgene technology ）。 转基因技术基本原理 1 、 目的基因的获取 2 、 克隆载体的选择和构建 3 、 外源基因与载体的连接 4 、 DNA 导入受体 5 、 重组体的筛选 6 、 克隆基因的表达 重组 DNA 技术操作的主要步骤 载体 质粒 噬菌体 病毒 目的基因（外源基因） 基因组 DNA cDNA 人工合成 PCR 产物 限制酶消化 开环载体 DNA 目的基因 连接酶 重组体 转化 体外包装，转染 带重组体的宿主 筛选 表型筛选 酶切电泳鉴定 分子杂交 目 录 ( 插 入 失 活 法 ) 抗 药 性 标 记 选 择 目 录 原 位 杂 交 目 录 Southern 印迹 目 录 常用的植物转基因方法 ? 遗传转化的方法按其是否需要通过组织培养、再生植株可 分成两大类 : ? 1 、需要通过组织培养再生植株，常用的方法有农杆菌介 导转化法、基因枪法； ? 2 、不需要通过组织培养，目前比较成熟的主要有花粉管 通道法。 常用的动物转基因技术 ? 1 ．核显微注射法 ? 2 ．精子介导的基因转移 ? 3 ．核移植转基因法 ? 4 ．体细胞核移植法 ? 过去的几千年里农作物改良的方式主要是对自然突变产生 的优良基因和重组体的选择和利用，通过随机和自然的方 式来积累优良基因。遗传学创立后近百年的动植物育种则 是采用人工杂交的方法，进行优良基因的重组和外源基因 的导入而实现遗传改良。 因此，转基因技术与传统技 术是一脉相承的，其本质都是通过获得优良基因进行遗传 改良。 转基因技术发展情况 ? 一是品种培育速度加快。随着生命科学、基因组学、信息 学等学科的发展，目前全球转基因生物新品种已从抗虫和 抗除草剂等第一代产品，向改善营养品质和提高产量的第 二代产品，以及工业、医药和生物反应器等第三代产品转 变，多基因聚合 ? 二是产业化应用规模迅速扩大。全球已有 25 个国家批准了 24 种转基因作物的商业化应用。转基因大豆、棉花、玉米、 油菜为代表的转基因作物种植面积迅速增长。 ? 三是生态和经济效益十分显著。 1996 至 2007 年，全球转 基因作物的累计收益高达 440 亿美元，累计减少杀虫剂使 用 35.9 万吨。 2008 年，全球转基因产品市场价值达到 75 亿 美元。 ? 植物：抗虫、抗病、抗除草剂 植物培育、改良作物品质（富 含赖氨酸的玉米） ? 动物：提高生长速度、生产药 物蛋白、器官移植、乳腺生物 反应器 ? 微生物：疫苗 ? 基因治疗，生物治疗，基因诊 断，疾病基因的发现与克隆、 遗传病的预防 应用 基因敲除 (knock-out) ? 定义 ? 方法 ? 现状 定义 利用基因同源重组进行基因敲除 ? 发生在同源序列间的重组称为同源重组 (homologous recombination) ，又称基本重组。 是最基本的 DNA 重组方式，通过链的断裂和再连 接，在两个 DNA 分子同源序列间进行单链或双链 片段的交换。 ? 同源重组需要一些重组蛋白和酶，如 Rec A 、 B 、 C 、 D 及 DNA 连接酶等 ? 最为广泛 ? Holliday 模型中，同源重组主要 4 个关键步骤 ： ①两个同源染色体 DNA 排列整齐 ②一个 DNA 的一条链断裂、并与另一个 DNA 对应的 链连接，形成 Holliday 中间体 ③通过分支移动产生异源双链 DNA ④ Hollida