2019年转基因动物制备技术教育.pptVIP

6. 转基因技术 （ Transgenic technology ） 6.1 转基因与转基因动物 概念 转基因： 1 ）将人工分离和修饰过的基因导入到生物体 基因组中，由于导入基因的表达，引起生物体 的性状的可遗传的修饰，称之为转基因技术。 2 ）转基因技术就是指利用分子生物学技术， 将某些生物的基因转移到其它物种中，改造生 物的遗传物质，使遗传物质得到改造的生物在 性状、营养和消费品质等方面向人类需要的目 标转变。 转基因动物 是指那些在其所有体细胞基因组内稳定整合 着以实验方法导入的外源 DNA 的一类动物 ，这类动物由于外源遗传物质的稳定存在而 被赋予某种新的表型。这种表型可通过携带 外源遗传物质的生殖细胞而传递给子代动物 个体。 转基因的方法 1 、 DNA 显微注射法： 将 DNA 注射到胚胎的细胞核内，再 把注射过 DNA 的胚胎移植到动物体内，使之发育成正常 的幼仔。 2 ．逆转录病毒感染法： 利用逆转录载体将遗传信息以 RNA 分子的形式，在逆转录整合酶和逆转录基因组末端 的特异性核酸序列的作用下，反转录并整合到宿主基 因组中去，最终得到转基因小鼠。 3 ．胚胎干细胞法： 将转染的胚胎干细胞注射入受体囊 胚腔，参与嵌合体的形成，将来出生的动物的生殖系 统就有可能整合上外源基因，通过杂交繁育得到纯合 目的基因的个体 显微注射法建立转基因鼠 技术路线 1. 显微注射 DNA 的制备与纯化 2. 鼠的种类、安置与饲养 3. 超排卵与取卵 4. 显微注射 5. 卵的转移 6. 转基因鼠系的建立 实验程序 ： 1. 显微注射 DNA 的制备与纯化 1 ）酶解、分离与抽提 2 ）氯化铯离心 3 ）收集 DNA 溶液 4 ）透析与定量 2. 鼠的种类、安置与饲养 3. 超排卵与取卵 1 ）超排卵： 4~6 周母鼠在明暗循环的动物房内饲养 3~5 天， 即可作超排卵。用孕马血清（ PMS ）模拟卵泡 刺激素（ FSH ）的作用，用人绒毛膜促性腺激 素（ hCG ）模拟黄体生成素（ LH ）的作用。 影响鼠超排卵的因素有：母鼠的种系、周龄与 体重，激素应用剂量与注射时间。卵能否受精 则取决于公鼠的生殖能力。 2 ）取卵： 4. 显微注射 1 ）制备持卵管与注射针 持卵管的作用是连接负 压装置可吸住卵以利注 射，注射针是吸入 DNA 溶液后连接注射器或压 力泵将 DNA 注射入受精 卵内，二者均可由 1 毫米 口径的微玻璃管拉制而 成。 2 ）显微注射操作 倒置显微镜可配 用培替培养皿作 注射槽，滴 1 大滴 M 2 培养液在培养 皿中心，上面覆 盖矿物油。 5. 卵的转移 1 ）输卵管移卵 2 ）子宫移卵 6. 转基因鼠系的建立 假孕母鼠产出幼仔后，可用幼鼠尾巴提取 DNA ，对于一些基因调控研究，需要尽快获得 信息而暂不需保留转基因鼠，亦可取鼠胚胎 提取 DNA 。 从胎鼠组织或幼鼠尾巴提取的 DNA ，可用 PCR 、 Dot blot （斑点杂交）、 Southern blot 等多种方法分析以确定是否为转基因鼠 用途 1. 转基因动物生物反应器： 生物反应器是指利用转基因活体动物的 某种能够高效表达外源蛋白的器官或组 织来进行工业化生产活性功能蛋白的技 术，这些蛋白一般是药用蛋白或营养保 健蛋白。