10.4中药的含量测定 (1).pdf

中药的含量测定 一、中药的含量测定方法 含量测定指用适当的化学方法或仪器分析方法对中药及其制剂某种（些）有效 成分或有效部位进行定量分析，判断药品优劣和评价药品质量。 中药含量测定的常见方法与化学药物的含量测定方法类似，分为化学分析法和 仪器分析法。化学分析法包括容量分析和重量分析法，仪器分析法包括高效液相色 谱法、气相色谱法、毛细管电泳。中药成分复杂，含量测定方法应具有较好的专属 性，因此仪器分析方法更为常用。 二、薄层色谱法 薄层色谱法用于中药的含量测定常采用薄层扫描的方法。原理是用一定波长的 光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧 光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品定性定量分析。包括薄层 色谱-紫外分光光度法和薄层色谱-可见光分光光度法。 薄层扫描的方法有单波长和双波长法。单波长适用于荧光测定法，即用某一波 长的紫外光（激发光）进行扫描。双波长主要用于吸收测定法。通过双波长可消除 背景干扰。 常用的光源有钨灯、氘灯、氙灯，可供不同的测定需求，钨灯用于可见光测定， 波长范围为350～800 nm，可扫描有色成分的斑点。氘灯用于紫外测定，波长范围 为200～400 nm ，用于扫描有紫外吸收的成分斑点。氙灯Xe可发射不连续光谱，常 用波长为365 nm，用于荧光测定。 薄层色谱法常采用外标法进行含量测定。测定原理为将供试品溶液和对照品溶 液分别点加在同一块薄层板上，展开，显色，定位，扫描被测成分和对照品斑点， 测得相应的吸收度或荧光强度积分值，根据定量关系，计算出被测成分的含量。根 据对照品标准曲线性质的不同，可分为外标一点法和外标两点法。选择测定方法的 根据为:当标准曲线通过原点，采用外标一点法。直线方程为 C = FA ，F为斜率如 若标准曲线不通过原点，则采用外标两点法。直线方程为C = F A+F ，F 为斜率， 1 2 1 F 为截距。 2 示例1：九分散中士的宁的含量测定 九分散是由马钱子粉、麻黄、乳香和没药等制成。马钱子粉中含有士的宁、番 木鳖碱等生物碱，具生理活性但也有毒性，故需控制马钱子含量。中国药典规定按 干燥品计每包含马钱子以士的宁计应为4.5～5.5 mg。 溶液制备：取本品10包，混合研匀。精密称取2 g置具塞锥形瓶中，精密加氯仿 20 ml与浓氨试液1 ml，轻轻摇匀，称重，于室温下放置24小时，再称重，补足氯仿 减失的重量，充分振摇，滤过。精密量取滤液10 ml，用硫酸溶液 （3→300）分次提 取，至生物碱提尽，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加浓氨试液使呈碱性，用氯 仿分次提取，合并氯仿液，蒸干，放冷，残渣中精密加氯仿5 ml使溶解，作为供试 品溶液。对照品溶液的浓度为每1 ml含0.4 mg士的宁氯仿对照溶液。 测定法：吸取上述两种溶液各5 μl ，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯 -丙酮-乙醇-浓氨试液。（16 ∶12 ∶1 ∶4 ）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。 按照薄层色谱法进行扫描，测定波长为λs=254 nm ，λR=325 nm ，测量供试品吸收 度积分值与对照品吸收度积分值，按外标法计算含量。 三、方法学验证 中药含量测定的方法验证内容包括:准确度，精密度，专属性，检测限，定量限， 线性范围，耐用性。这里简介准确度和专属性。 1.准确度 准确度是指测定结果与真实值或参考值接近程度，一般通过回收率实验进行评 价。中药分析回收率的测定方法和化学药物不同，一般采用加样回收率的方法。方 法是向已知被测成分含量的供试品中加入一定量的已知纯度的被测成分对照品，用 实测值与供试品中含量的差值，再除以加入对照品的量来计算回收率。回收率等于 实测值减去供试品中所含被测成分量，除以加入对照量，乘以100%。 值得注意的是加样回收规定的测试方法为取同一浓度，实际相当于100%浓度水 平的供试品，用至少测定6次的结果进行评价；也可以采用3个不同浓度，每个浓度 分别制备3份供试品溶液进行测定，用9个测定结果进行评价。由于中