10第十章 弧菌属检验、气单胞菌属检验.pdf

临床微生物学检验技术 第十章 弧菌属检验、气单胞菌属检验 临床微生物学检验技术 第一节弧菌属 临床微生物学检验技术 一、临床意义 • 1．霍乱弧菌致病机制 • 霍乱弧菌可以从胃进入肠道，通过鞭毛运动穿过肠黏 膜表面的粘液层，由菌毛的作用定植于肠黏膜上皮细胞 表面繁殖，产生由染色体介导的对热不稳定的霍乱毒素 （cholera toxin, CT ），霍乱毒素是由A亚单位和B亚单位 构成的多聚体蛋白，A亚单位由两部分构成：A1是腺苷 二磷酸核糖基转移酶，是腺苷二磷酸核糖转移到结合于 膜上的Gs蛋白上，Gs蛋白激活腺苷酸环化酶，细胞内 cAMP水平增高，导致肠腔内离子和水过度分泌；A2可 辅助细菌进入细胞。B亚单位是由5个相同的单体组成， 可以和小肠黏膜上皮细胞神经节苷脂受体结合。霍乱毒 素与肠粘膜上皮细胞结合，导致细胞快速向细胞外分泌 水和电解质，使肠腔内水、钠潴留导致呕吐和剧烈腹泻， 出现霍乱特征性的“米泔水”样便 临床微生物学检验技术 一、临床意义 2．副溶血性弧菌致病机制 通过菌毛的粘附，产生耐热直接溶血素（thermostable direct hemolysin, TDH）而致病，该毒素能耐受100℃10min不被 破坏。它表现为①TDH对人和兔RBC的溶血性较高，对马RBC不溶血 ；②对多种培养细胞如Hela细胞、FL细胞及鼠心肌细胞有细胞毒性 ；③心毒性作用，可导致心电图异常表现；④肠毒性作用，使肠黏 膜的毛细血管通透性增高，肠液分泌亢进 临床微生物学检验技术 二、生物学特性 1．霍乱弧菌 兼性厌氧，营养要求不高。生长繁殖的温度范围广（18～ 37℃），耐碱不耐酸，在pH8．8～9．0的碱性蛋白胨水或碱性 琼脂平板生长良好，初次分离霍乱弧菌常用碱性蛋白胨水增菌 。霍乱弧菌可在无盐环境中生长。过氧化氢酶、氧化酶均阳性 ，能发酵很多常见的单糖、双糖和醇糖，产酸不产气；不分解 阿拉伯糖；还原硝酸盐，吲哚阳性。对弧菌抑制剂O/129敏感 临床微生物学检验技术 二、生物学特性 2．副溶血性弧菌 嗜盐性，培养基以含3%NaCL适宜，无盐不能生长。在 血平板（含羊、兔、马等血液）不溶血或只产生α溶血； 在含高盐（7%）的人O型血或兔血以D-甘露醇作为碳源的 Wagatsuma琼脂平板上可产生β溶血，称为神奈川现象（ Kanagawa phenomenon, KP） 临床微生物学检验技术 三、微生物学检验 1.霍乱弧菌 粪便或呕吐物等标本接种分离或鉴别培养基，在分离菌落 上进行氧化酶试验、O/F试验（氧化/发酵试验），氧化酶阳性 、O/F试验发酵，进行弧菌科生化反应（弧菌科编码）。编码 结果为霍乱弧菌，进行O1多价血清凝集试验，O1多价凝集再进 行小川型、稻叶型、彦岛型单价凝集，和其中一个单价凝集， 立即上报疾病控制部门；O 多价不凝集，进行O 血清凝集， 1 139 O139凝集，立即上报疾病控制部门，O139不凝集，则根据理论教 材表10．1～10．5进行鉴别试验 临床微生物学检验技术 三、微生物学检验 2．副溶血性弧菌 粪便或呕吐物等标本接种分离或鉴别培养基，在分离菌落 上进行氧化酶试验、O-F试验（氧化-发酵试验），氧化酶阳性 、O-F试验发酵，进行弧菌科生化反应（弧菌科编码）。编码结 果为副溶血性弧菌，予以直接报告 临床微生物学检验技术 四、药敏试验的药物选择 1．霍乱弧菌 一般实验室不能开展药敏实验 2．副溶血弧菌 • 培养基：纸片扩散法：Mueller-Hinton琼脂(MHA) • 肉汤稀释法调节阳离子的Mueller-Hinton肉汤(CAMHB) • 接种物：直接菌落悬液法（0．85%生理盐水），相当于0．5麦氏标 准 •