11.2 生物制品分析程序.pdf

生物制品分析的基本程序 为确保生物制品的质量，世界各国都制定了相应的国家级质量标准。随着我国生物制品 的不断发展，以及生命科学、分析化学等的迅猛发展，各学科之间相互渗透、相互促进，大 大推动了生物制品分析的发展。随着生物制品质量研究的深入，我国生物制品的质量标准也 在不断完善和进步。1959 年我国出版了第一部《生物制品制造检定规程》，其后于 1979～ 2000 年间，出版了6 版《中国生物制品规程》，并于2003 年发行了2000 年版《中国生物 制品规程》英文版，2005 年起将《中国生物制品规程》并入药典，作为中国药典三部。 2015 年版《中国药典》在治疗性生物技术药方面，修订收入了2010 年版《中国药典》 33 个各论，取消了1 个各论; 新增了5 个各论，其中2 个来自2010 版第二增补本。2015 年版《中国药典》修订收入了2010 年版《中国药典》与生物技术药密切相关的10 个通则， 另外还有与其他生物制品共用的检定方法; 新增了7 个通则。其中干扰素生物学活性测定法 第二法( 报告基因法) 是2015 年版《中国药典》新增方法的亮点。 截止 2015 年 3 月，CFDA 已批准包括重组细胞因子、酶、激素、治疗性单抗、融合 蛋白、PEG-蛋白和基因治疗药物等各类生物技术药39 种。随着大多数生产企业的技术进步 与产品质量的不断提高，我国已初步具备生物技术药总体质量标准提高的条件，并有望在下 一版《中国药典》新收载的生物技术药制造与检定规程均能达到总论的相关要求。 生物制品分析的程序与其他药物一样，也是分为取样、鉴别、检查、含量（生物效价） 测定、出检验报告几个步骤。但生物制品在分析的过程中，鉴别、检查、含量（生物效价） 测定等步骤所采用的方法与化学药和中药分析不完全相同。 一、鉴别 对于多数生物制品，可以利用其特征的理化性质、生化和生物学性质进行专属性较强的 鉴别，但仍有一部分生物制品由于结构复杂，尚未找到专属、可行的鉴别方法。常用的生物 制品鉴别方法包括理化鉴别法、生化鉴别法、生物鉴别法等。 1. 化学鉴别 化学鉴别所采用的化学反应通常是现象明显、反应迅速的显色反应、沉淀反应等，利用 生成有色产物或沉淀进行鉴别。生物制品的化学鉴别方法通常具有快速、简便的特点，但其 专属性较差。例如溶菌酶（Lysozyme ）的鉴别是利用溶菌酶肽键在碱性条件下与 Cu2+络合 生成有色配位化合物的显色反应进行的，其方法为：取本品约 2mg ，加水2 滴使溶解，加 10％氢氧化钠溶液5 滴与10％硫酸铜溶液1 滴，混匀后显紫红色。 2. 物理鉴别 物理鉴别方法主要包括紫外分光光度法、高效液相色谱法等。紫外分光光度法利用药物 紫外吸收光谱特征测定最大吸收波长或特定波长处吸收度的比值等进行鉴别；高效液相色谱 法利用药物在液相色谱系统中供试品和对照品保留行为的一致性进行鉴别。 例如，注射用重组人干扰素γ 原液检定采用紫外光谱扫描进行鉴别，规定最大吸收峰波 长应为280±3nm 。 3、生化鉴别法 生物制品的理化鉴别方法通常专属性较低，鉴别时较多利用生物制品专属性强的生物化 学性质进行鉴别。常见的生化鉴别方法主要包括免疫法、酶法、电泳法等。 1）免疫法 多数生物制品都是大分子，具有免疫活性，可利用特征性强的免疫反应进行鉴别。由于 方法专属、灵敏，免疫鉴别的方法在生物制品的鉴别中应用最为广泛。 例如人免疫球蛋白采用免疫双扩散法和免疫电泳法进行鉴别，免疫双扩散法中它仅与抗 人血清发生抗原抗体反应形成免疫复合物的沉淀线，而抗马、抗牛、抗猪及抗羊血清均不产 生沉淀线，免疫电泳法中与正常人血清比较，主要沉淀线为IgG 。 2 ）酶法 对于酶类生物制品，其特征的酶学性质也可用来作为鉴别。链激酶是专属性强的蛋白水 解酶，可以激活纤溶酶原转化为纤溶酶，引起纤维蛋白的溶解，使纤维蛋白平板中出现溶圈， 如图1 所示，作为判断指标。 图1、纤维平板法鉴别链激酶 3 ）电泳法 电泳法是将带电荷的蛋白质、核酸等在琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等惰性介质中，在 电场作用下，组分按各自的速度泳动分离成多个狭窄的区带，采用适当的方法记录谱图，可