Canopy2对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响.pdf

目 录 中文摘要I 英文摘要Ⅳ 常用缩写词中英文对照表VIII 前 言1 第一部分 CNPY2在大鼠体内缺血再灌注模型中的表达模式3 1 材料与方法3 1.1 试剂与仪器设备3 1.2 常用溶液配方5 1.3 实验方法7 1.3.1大鼠心肌缺血再灌注损伤动物模型的建立7 1.3.2 大鼠心脏样本采集7 1.3.3Western Bloting8 1.3.4 免疫荧光技术9 1.3.5统计学分析10 2 结 果11 2.1CNPY2在大鼠心肌的表达定位11 2.2 大鼠体内缺血再灌注模型中CNPY2 的蛋白表达情况12 3 结 论13 第二部分 细胞水平观察CNPY2是否影响缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡14 1 材料与方法14 1.1 试剂与仪器设备14 1.2 常用溶液配方15 1.3实验方法15 1.3.1H9c2 细胞培养15 1.3.2 CCK-815 1.3.3Hoechst33258检测心肌细胞H9c2 的凋亡16 1.3.4Westernbloting16 1.3.5腺病毒感染细胞17 2 结 果19 2.1Ade-hCNPY2 -Flag 腺病毒载体结构示意图19 2.2 氧化损伤模型的建立19 2.3 体外心肌细胞过表达CNPY221 2.4 过表达CNPY2在缺血再灌注条件下抑制心肌细胞凋亡24 3 结 论26 第三部分 外源性CNPY2 降低大鼠心肌缺血再灌注损伤和改善心功能的研究27 1 材料与方法27 1.1试剂与仪器设备27 1.2 常用溶液配方28 1.3实验方法28 1.3.1动物模型的制备28 1.3.2Westernbloting28 1.3.3免疫组织化学染色28 1.3.4 TUNEL染色29 1.3.5心脏超声检查心功能30 2 结 果31 2.1外源性CNPY2感染大鼠IR 心脏31 2.2 CNPY2对大鼠IR 心脏凋亡的影响33 2.3CNPY2对大鼠IR 心脏心功能的影响35 3 结 论36 4 讨 论37 参考文献39 综 述42 致 谢55 个人简历56 山西医科大学硕士学位论文 Canopy2对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响 摘 要 目的： 急性心肌梗死 （AMI）是一种常见且致死率高的心血管疾病，是导致心力衰竭 [1] 的常见原因之一 。缺血心肌的血运重建即再灌注，能够有效减少AMI 梗死面积， 改善AMI预后的有效策略，对于挽救缺血性心脏病患者的生命至关重要。然而，再 [2] 灌注本身可加重致死性心肌损伤，称为心肌缺血再灌注损伤 （IRI） 。缺血组织快 速恢复血流会导致大量活性氧簇 （ROS）的生成和蓄积，造成组织不可逆损伤，加 [3] 重细胞死亡，即氧化应激损伤 ，是心肌IRI 的重要组成部分。研究证实减少AMI 早期心肌细胞死亡，尤其是梗死边缘区心肌细胞的凋亡性死亡，能够明显降低心肌 IRI，改善后期心功能，是治疗AMI 的主要研究方向之一。 Canopy2(Canopy FGF signalingregulator 2，CNPY2）属于Canopy 蛋白家族，简 称CNPY2，它含有一个Saposin 样结构域和6个二硫键，由182个氨基酸 （分子量