CLIC1调控细胞内ROS参与宫颈癌SiHa细胞迁移与侵袭.pdf

目 录 中文摘要I 英文摘要Ⅲ 常用缩写词中英文对照表Ⅵ 前言1 1 材料与方法2 1.1 细胞来源2 1.2 主要仪器2 1.3 实验试剂2 1.4 实验方法4 1.5 统计学方法6 2 结 果7 2.1H-R 条件上调SiHa细胞CLIC1蛋白的表达7 2.2H-R 条件下CLIC1参与SiHa细胞ROS 的产生7 2.3H-R 条件下CLIC1影响SiHa细胞迁移能力8 2.4H-R 条件下CLIC1参与SiHa细胞侵袭过程9 2.5 附图10 3 讨 论14 4 结 论20 参考文献19 综 述22 致 谢32 个人简介35 山西医科大学硕士学位论文 CLIC1调控细胞内ROS参与宫颈癌SiHa细胞迁移与侵袭 摘 要 目的： 宫颈癌由于其高发病率和和转移率一直在女性恶性肿瘤中占据一席之地，明确宫 颈癌细胞的转移扩散机制对于其临床策略的探索有着非比寻常的意义。细胞内氯离子 通道蛋白1 （chloride intracellular channel 1,CLIC1）在恶性肿瘤进展过程中发挥的作 用已被国内外多项研究所证实，但具体功能和机制仍不清楚。畸形血管系统是恶性肿 瘤所具有的普遍特征，这种异常的血管系统使得肿瘤细胞周围生长环境发生慢性改 变，最终形成一种长期持续的缺氧-再加氧(hypoxia-reoxygenation,H-R)环境。而这一 转变所带来的最直接的结果就是肿瘤细胞中活性氧水平 （reactive oxygen species, ROS）的提升，肿瘤细胞的恶性表型在 ROS作用下发生转变，进一步加速肿瘤的恶 性进展过程。本研究观察缺氧-再加氧环境中CLIC1对宫颈癌SiHa细胞内ROS水平的影 响，进而对宫颈癌的进展机制进行探讨。 方法： 通过物理条件构建宫颈癌SiHa细胞H-R模型和常氧模型；对不同培养环境中的 SiHa细胞给予IAA94 （CLIC1特异性抑制剂，20μmol/ L）、DPI （NADPH氧化酶抑 制剂，15μmol/ L）、NAC （抗氧化剂，20mmol/ L）药物处理，各组细胞中CLIC1蛋 白的相对表达量通过Western-blot方法检测；不同药物处理后SiHa细胞内ROS含量使用 2,7-二氯荧光黄双乙酸盐(2,7-Dichlorodi-hydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探 针试剂盒检测；利用划痕实验及细胞侵袭实验观察常氧及H-R条件下各组细胞迁移及 侵袭能力的改变。获取数据通过SPSS22.0 软件完成最终分析处理。 结果： 1. Western-blot H-R CLIC1 3.57 0.03 方法测得 组 蛋白的相对表达量 （ ± ）显著高于常氧 1.00 1.18 P0.01 H-R+IAA94 CLIC1 2.39 组 （ ± ） （ ）， 组细胞中 蛋白的相对表达量 （ 0.01 H-R 3.57 0.03 P0.01 H-R+DPI H-R+NAC ± ）明显低于 组 （ ± ） （ ）， 组和 组细胞 I 山西医科大学硕士学位论文 中CLIC1蛋白的相对表达量 （2.83±0.03、2.85±0.02）明显低于H-R组 （3.57±0.03） （P0.01）。 2. 荧光探针技术检测各组SiHa细胞内ROS含量的结果显示，相对于常氧组，缺氧再 加氧条件下培养的SiHa细胞内ROS的相对含量出现增加 （P0.01），而与H-R组相比， H-R+IAA9