发酵工艺的中种子扩大培养.pptVIP

第四节种子扩大培养 种子扩大培养的任务 工业生产规模的增大—一需要种子就增多 种子的扩大培养 种子扩大培养的任务,不但要得到纯而壮的培养 物,还要获得活力旺盛的、性能稳定、接种数量足 够的、纯的培养物 菌种的活化与种子的扩大培养的区别?  菌种扩大培养的目的 为发酵罐的投料提供足够数量的代谢旺盛的种 子。因为发酵时间的长短和接种量的大小有关,接 种量大,发酵时间则短。将较多数量的成熟菌体接 入发酵罐中,就有利于缩短发酵时间,提高发酵罐 的利用率,并且也有利于减少染菌的机会。 对于不同产品的发酵过程来说,必须根据菌 种生长繁殖速度快慢及生产的规模决定种子扩大培 养的级数  种子扩大培养(制备)阶段 实验室种子的制备: 生产车间种子制备: A实验室种子的制备 eg产黄青霉菌( Pchrysogenum) 原始菌种—→斜面试管获得孢子 250m茄子瓶(大米或小米)25~28℃,4~-14天 成熟(在真空下抽去水分,使水分含量在10%以下 于4℃冰箱保存)。  对于不产孢子的赤霉素生产菌( Gibberelline fujikuroi) 也可用大米固体培养基在茄子瓶中培养菌丝体,用作种子罐种 产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种,如产链霉素的灰色 链霉菌(S. griseus),产卡那霉素的卡那链霉菌 (S. kanamyceticus),可以用摇瓶液体培养法,孢子接入含液 体培养基的摇瓶中,于摇床上培养,获得菌丝体,作为种子。 不产孢子的细菌,如生产谷氨酸的棒状杆菌 ( Corynebacterium)、短杆菌( Brevibacterium),生产上一般 采用斜面营养细胞进行扩培,再转入液体摇瓶培养,获得细胞 悬液再接种。  eg, Glutamic acid- producer:(谷氨酸生产菌 原始菌种(出发菌种)一固体试管斜面(32°C,18~24小时) 三角瓶培养(摇床)( flask culture) 种子罐培养 e.g. yeast: 原始菌种(出发菌种)—10m麦汁试管—250ml三角瓶培养 (27°C-28°C,3天)(25°C,2天) 5~10L卡氏罐 (15°C~20°C,3~5天)  B:生产车间种子制备: 种子罐的作用:使有限数量的孢子(菌体)发芽、生长、 并繁殖成大量的菌丝体(菌体),满足发酵罐的需要(菌体生 长和产物形成)。实验室种子进入种子罐有孢子进罐法和 摇瓶菌种进罐法。 种子罐级数的确定:种子罐级数是指制备种子逐级扩 培的次数。 依据:菌种生长特性,孢子发芽及菌体繁殖的速度以 及所用的发酵罐的容积。 种子罐( seeding tank)的级数 产物的品种 生产规模 工艺条件  种子罐级数越少越好,原因: 简化生产工艺和控制 减少接种带来的染菌机会 需考虑:尽量延长发酵罐生产产物的时间,缩短由于种子发芽、生产 而占用的非生产时间,以提高发酵罐的生产率[产物/mlh] eg. Glutamate fermentation一级种子扩培 实验室种子—种子罐—→发酵罐 eg. penicillin fermentation二级种子扩培 实验室种子一级种子罐—→二级种子罐—→发酵罐 e:g. Streptomycin fermentation三级种子扩培 实验室种子→一级种子罐—二级种子罐-→三级种子罐一→发酵罐 ( Streptomyces griseus)--灰色链霉菌  种龄与接种量: 种龄( (seed age)指种子罐培养种子从开始至结束的培养时间。 在种子罐中,培养时间延长一一菌体量增加一一基质消耗及代谢产 物积累一一菌体量不再增加一一老化 过老:生产能力下降,菌体自溶 过嫩:前期生长缓慢,发酵周期延长,产物形成时间推迟,甚至造 成异常发酵。 适宜时间:以菌体处于生命力极为旺盛的对数生长期( exponential phase),且培养液中菌体量还未达到最高峰时,较为适宜。 嗜碱性芽孢杆菌( Bacillus alkalophilus)生产碱性蛋白酶( alkaline proteinase/protease),培养12小时接种,酶活最高。  接种量 seed volume指移入的种子的体积和接种后培养液的体积 比。 Antibiotic:7%7.5% Glu 190 接种量的大小决定于生产菌种在发酵罐中的繁殖速度。 釆用较大接种量可以缩短发酵罐中菌体繁殖到达高峰的时间,使产 物形成提前 原因:1、种子多,种子液中含有大量的胞外水解酶,有利于 对基质的利用 2、生产菌迅速占据了整个培养环境,减少染菌机会。 但过多,易使菌体