CRISPR技术及应用前景和投资策略分析报告2020.pdfVIP

证券研究报告—— CRISPR技术及应用前景 2020年10⽉19 ⽇ 1.1 CRISPR/Cas9技术原理 • CRISPR/Cas9 系统，为⽬前发现存在于多数细菌与绝⼤多数的古菌中的⼀种后天免疫系 统，以消灭外来的质粒或者噬菌体，并在⾃⾝基因组中留下外来基因⽚段作为“记忆” 。 将靶向⽚段“带领”到 全名为常间回⽂重复序列丛集/ 常间回⽂重复序列丛集关联蛋⽩系统（Clustered Cas9蛋⽩中 Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR-associated proteins）。 Cas9蛋⽩负责 识别，剪切 • CRISPR/Cas9系统主要是由Cas9 蛋⽩和单链导向RNA (single guide RNA, gRNA ) 组成， 其中Cas9 蛋⽩具有切割DNA 双链的功能，gRNA起导向作⽤，Cas9 蛋⽩可以在 gRNA 的导向下通过碱基互补配对到达不同的靶部位，切割靶基因来对基因进⾏定点的 精确编辑。CRISPR/Cas9 定向剪切需要满⾜⼏个条件： • 第⼀，待编辑的区域附近需要存在相对保守的PAM序列，为常见的NGG序列，PAM序 列之前为可以被Cas9蛋⽩特异性识别并切割的序列，通常约20个碱基长。 • 第⼆，向导RNA要与PAM上游的序列碱基互补配对。最基础的应⽤就是基因敲除。如 果在基因的上下游设计⼀对向导RNA （gRNA1 ，gRNA2），将其与含有Cas9蛋⽩编码 剪切后可以删除 或插⼊新的⽚段 基因的质粒⼀同转⼊细胞中，gRNA通过碱基互补配对可以靶向PAM 附近的⽬标序列， Cas9蛋⽩会使该基因上下游的DNA双链断裂。随后⽣物体⾃⾝存在着DNA损伤修复的 应答机制，会将断裂上下游两端的序列连接起来，从⽽实现了细胞中⽬标基因的敲除。 • 如果在此基础上为细胞引⼊⼀个修复的模板质粒（Donor DNA），这样细胞就会按照 提供的模板在修复过程中引⼊⽚段插⼊（Knock-in）或定点突变（site-specific mutagenesis ）。这样就可以实现基因的替换或者突变。随着研究的深⼊，CRISPR/Cas 技术已经被广泛的应⽤，除了基因敲除，基因替换等基础编辑⽅式，它还可以被⽤于 基因激活，疾病模型构建，甚⾄是基因治疗。 • 其中，选取合适的外显⼦编辑⽚段和设计gRNA都可以通过免费的公开平台，如 Pubmed ，AddGene 等完成。 资料来源：Vox ，兴业证券经济与⾦融研究院整理 2 1.2 CRISPR/Cas9技术路径概览 • 以⼈体T细胞的基因编辑为例，主要 编辑效率 CRISPR/Cas9技术路径如右图： • 将患者⾎液样本中的T 细胞进⾏分离、活化，得 剪切位点