骨髓移植治疗对大鼠后肢缺血的影响.docVIP

PAGE PAGE 2 骨髓移植治疗对大鼠后肢缺血的影响 缩 略 词 表 Abbreviation 缩略词 英文全称 中文全称 VEGF vascular endothelial growth factor 血管内皮生长因子 RT-PCR Reverse transcription polymerase chain reaction 逆转录多聚酶链反应 SD Sprague-Dawley 远交群 ELISA enzyme linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附测定 mRNA messenger ribonucleic acid 信使核糖核酸 DSA digital subtraction angiography 数字减影血管造影 EB Estradiol bromination 溴化乙淀 EPC Endothelial Progenitor Cell 内皮组细胞 MSCs mesenchymal stem cells 间充质干细胞 PAGE 33 中 文 摘 要 目的 将非纯化的骨髓细胞悬液和纯化的骨髓干细胞悬液分别移植于清洁级雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠缺血的后肢，观察移植后SD大鼠体内血管内皮生长因子的表达变化以及对缺血后肢血管新生和功能的影响，探讨骨髓移植治疗下肢缺血性疾病的价值。 方法 穿刺骨髓腔用含肝素的PBS液反复冲洗骨髓腔，获骨髓细胞悬浮液，用密度梯度离心法可获得纯化的骨髓干细胞，用PBS重悬制成细胞悬液；结扎并切除SD大鼠右侧股动脉及其分支建立实验性股动脉闭塞动物模型，随机分为3组，治疗1组（n=10）：非纯化的骨髓细胞悬液直接分点注射后肢缺血区肌肉进行细胞移植治疗；治疗2组（n=10）：纯化的骨髓干细胞悬液同法进行细胞移植治疗；对照组（n=10）：同法仅注射等量的PBS；移植术后4周，分别通过RT-PCR法和ELISA法来测定缺血区股部肌肉匀浆VEGF mRNA的表达情况和血清血管内皮生长因子（VEGF）处在哪个水平，数字减影血管造影（DSA）观察侧枝血管新生情况、激光多普勒血流仪测定皮肤微循环灌注量和进行肢体功能评分； 结果 （1）激光多普勒血流测定仪检测下肢血流改善情况 移植后4周，双侧后肢的皮肤灌注量之差治疗1组为14.1±6.6，治疗2组为19.9±7.2，对照组为31.4±9.6，两个治疗组较对照组明显减少差异均有统计学意义（p0.05）；治疗1组较治疗2组减少差异有统计学意义（p0.05）。 （2）评估肢体的功能 和对照相比较，对于两组治疗办法在术后2周右后肢肢体功能评分都没有多达的差异(P0.05)，不过对于术后3周和4周的情形其差异就比较明显(P0.05)，且术后4周治疗1组功能评分低于治疗2组，差异有统计学意义(P0.05)， （3）术后大鼠后肢动脉DSA造影的结果 对1和2组大鼠进行术后为期4个周的治疗后通过腹主动脉造影显示治疗组的右后肢形成了比较好的的侧支循环，将两组治疗组进行比较，治疗1组侧支循环的建立比治疗2组的侧支循环要多，还可以看到，在对照组中只有少许侧支循环形成。 （4）各组大鼠血清中VEGF含量和VEGF mRNA检测结果的比较 术后4周，两个治疗组动物血清中VEGF含量较对照组明显升高，并且治疗1组动物血清中VEGF含量高于治疗2组动物，差异均有统计学意义（p0.05）；两个治疗组后肢肌肉VEGF mRNA的表达较对照组明显增高（P0.05），治疗1组肌肉VEGF mRNA的表达高于治疗2组（P0.05）. 结论 非纯化的骨髓细胞和纯化的骨髓干细胞分别移植治疗大鼠后肢缺血是有效的，可能通过VEGF的分泌增多促进缺血后肢侧支循环的建立，改善大鼠肢体功能；非纯化的骨髓细胞移植治疗的疗效好于纯化的骨髓干细胞移植治疗。 关键词 血管内皮生长因子 ；大鼠；移植治疗；骨髓；干细胞 Effect of transplantation of bone marrow on hindlimb ischemia in rats Abstract Objective Non-purified bone marrow stem cell suspension and the suspension of purified bone marrow stem cells were transplanted into the hindlimb ischemia of clean male Sprague-Dawley (SD) rat. The expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and the effects on angiogenesis