分子生物学课件 第七章 蛋白质变异效应与短肽.pptVIP

穿膜肽 细胞穿膜肽是一类能携带大分子物质进入细胞的短肽,其穿膜能力不依赖经典的胞吞作用.经过对天然存在的细胞穿膜肽的生物化学性质研究,已经逐渐掌握了细胞穿膜肽的一些共有特性,这类物质均为带有正电荷的长短不等的多肽片段,其中富含精氨酸 发现了一类蛋白结构域, 诸如:HIV-1 Tat (48～60) 、ANTP (43～58) 、VB22 (267～300) 等,具有介导异源蛋白、寡聚核酸、金属螯合物等极性大分子直接透过细胞膜进入胞浆和核内的功能,国内有学者将其译为蛋白转导域(PTD ,protein t ransduction domain)。为理解方便,我们将这一蛋白结构域译为穿膜肽(MPP ,membrane－permeable peptide) 。 穿膜肽的结构特点 这些天然的或人工合成的多肽具有水溶性、低裂解性并通过非吞噬作用进入各种细胞膜，称之为穿膜肽（penetratin, 也有很多文献写作Trojan peptide）。 这些多肽具有水溶性、低裂解性并通过非吞噬作用进入各种细胞膜，称之为穿膜肽。 穿膜肽是由16个氨基酸组成，其中有7个残基为阳性基团，有两个Trp残基。穿膜肽的二级结构并非原先的α螺旋结构，而是随周围的环境变化而变化的。当有带电的脂质体存在时，多肽则以β折叠为主。 穿肽膜的机制目前并不十分清楚，不同的穿肽膜的穿膜机制方面可能相差很远。它可能是通过多肽上的2个Trp残基及其他带电残基与细胞膜脂基质的相互作用而引发的。穿膜肽的二级结构在穿膜过程中起什么作用现在还不清楚，但是它一直被认为主要是在穿膜过程中与生物膜脂双层相互作用。 穿膜肽细胞膜亲和性高、穿膜速度快、可迅速被降解，最重要的是对细胞膜没有破坏性。将它们作为细胞内转运工具，应用于细胞生物学、基因治疗、药物体内转运、临床药效评价等领域，具有诱人的前景。 研究发现穿膜肽可以双向穿越细胞膜。它还可以介导如DNA、多胺类，甚至比自身分子量大很多倍的寡聚核苷酸进入细胞内。值得一提的是，穿膜时，分子是作为一个整体插入，而不需要解折叠。该分子完全可以作为一种全新的载体，它不需要能量，可以挂载的分子的类型多，分子量大。 穿膜机制 有很多理由让我们相信，在穿膜过程中，这些带正电的氨基酸残基与脂双层上负电基团存在广泛的相互作用。 穿膜肽的穿膜机制极有可能是非特异性的，也就是说它不是建立在受体蛋白质识别的基础之上的。 穿膜肽的应用与局限 在应用方面，对于相对较大的分子，如核酸、多肽，甚至直径达200 nm 的顺磁性颗粒进入细胞，穿膜肽都是非常合适的载体。100 bp 以下的寡聚核苷酸、DNA，甚至RNA，都被成功地引入到细胞内。此外siRNA也被成功地引入到细胞内，100 个氨基酸残基以下的多肽都可以成功地穿膜。 血凝素(HA) 呈柱状，能与人、鸟、猪豚鼠等动物红细胞表面的受体相结合引起凝血，故而被称作血凝素。血凝素蛋白水解后分为轻链和重链两部分，后者可以与宿主细胞膜上的唾液酸受体相结合，前者则可以协助病毒包膜与宿主细胞膜相互融合。血凝素在病毒导入宿主细胞的过程中扮演了重要角色。血凝素具有免疫原性，抗血凝素抗体可以中和流感病毒。[2]? 神经氨酸酶(NA) 是一个呈蘑菇状的四聚体糖蛋白，具有水解唾液酸的活性，当成熟的流感病毒经出芽的方式脱离宿主细胞之后，病毒表面的血凝素会经由唾液酸受体与宿主细胞膜保持联系，需要由神经氨酸酶将唾液酸水解，切断病毒与宿主细胞的最后联系,使病毒能顺利从宿主细胞中释放，继而感染下一个宿主细胞。因此神经氨酸酶也成为流感治疗药物的一个作用靶点，针对此酶设计的奥司他韦是最著名的抗流感药物之一。[2]? * 内质网应激 编辑 内质网内环境的稳定是实现内质网功能的基本条件，因此内质网具有极强的内稳态体系。 但仍然有很多因素可导致内质网功能的内稳态失衡，形成内质网应激。 例如缺血再灌注损伤、氧化应激、同型半胱氨酸等化学物质处理、细胞内蛋白质合成过快以至于超过蛋白折叠能力、内质网钙代谢紊乱、卵磷脂合成障碍等多种物理、化学或遗传因素等均可引发内质网应激。 内质网是真核细胞中蛋白质合成、折叠与分泌的重要细胞器。细胞进化出一套完整的机制来监督和帮助内质网内蛋白质的折叠与修饰。而当错误折叠的蛋白质累积时，细胞通过一系列信号转导途径，对其进行应答，包括增强蛋白质折叠能力、停滞大多数蛋白质的翻译、加速蛋白质的降解等。如果内质网功能紊乱持续，细胞将最终启动caspase12依赖的细胞凋亡程序。这些反应被统称为未折叠蛋白质应答(unfolded protein response，UPR)。 由于ERS常导致内质网内未折叠蛋白质或错误折叠蛋白的蓄积，引起未折叠蛋白反应（unfolded protein response，UPR），所以一般用参与UPR的