双向凝胶电泳关键技术原理与应用.docVIP

双向凝胶电泳技术原理和应用 Principle and application of two-dimensional gel electrophoresis 姓名：XX 班级：检验本科1113班 学号：XXX 【摘要】 人类基因组计划和美国塞莱拉遗传信息企业于在美国《科学》杂志和英国《自然》杂志联合宣告，她们绘制出了正确、清楚、完整人类基因组图谱，至此，人类基因组计划已基础完成，伴随后基因组时代到来，蛋白质组学得到了空前发展，蛋白质组研究意在揭示基因表示真正实施生命活动全部蛋白质表示规律和生物功效。包含蛋白质组、蛋白质组学、功效蛋白质组学和结构基因组学等新概念提出，蛋白质组学已成为当今生物领域中极其活跃学科。其中双向电泳（two-dimensional electrophoresis，2.DE）是蛋白质组研究三大关键关键技术之一 【 abstract 】Human gene group plans and United States sailaila genetic information company Yu in United States Science under magazine and United Kingdom natural under magazine joint announced, they draws out has accurate, and clear, and complete of human gene Group map, at this point, human gene group plans has basic completed, as Hou gene group era of comes, protein group learn get has unprecedented of development, protein group research aimed at reveals gene express of real implementation life activities of all protein of express law and biological function. Includes proteome, proteomics, structural proteomics and functional genomics of new concepts, such as proposed, proteomics has become extremely active in the field of biological sciences. Two-dimensional gel electrophoresis (two-dimensional electrophoresis,2.DE) is one of the three key core technologies of proteome research 【关键词】双向电泳； 蛋白质组学； 后基因组时代 【 key words 】two-dimensional electrophoresis，2.DE proteomics Post-genomics era 【序言】因为蛋白质等电点和分子量是两个相互不相关关键性质，而2.DE同时利用了蛋白质间这两个性质上差异分离蛋白质，所以2.DE分离能力很强大，它甚至能将细胞中5000种蛋白分离开，2.DE在分离蛋白混合样品、比较差异方面有不可替换作用，结合质谱判定技术可查明大型蛋白复合物各组组分，和其它生物技术如分子生物学、分子遗传工程、免疫学、微量蛋白质自动氨基酸序列分析相结合，能够快速正确地发觉和判定新蛋白质。 【荧光定量PCR基础原理】【1-3】 双向电泳因为含有高分辨率和高灵敏度已成为分析复杂蛋白混合物基础工具［1］ 。自1975年OFarrel等［2］ 建立这种技术后，已经有很多改善，使得这一技术日趋完善。2-DE是利用蛋白质带点性和分子量大小差异，经过两次凝胶电泳达成分离蛋白质技术。第一向电泳是依据蛋白质等电点不一样，经过等电聚焦电泳（isoelec-tricfocusing，IEF）将不一样净电荷蛋白质在PH梯度介质中外加电场作用形成份离蛋白质区带。然后将凝胶包埋在SDS凝胶板上端，依据蛋白质分子量不一样，在垂直或水平方向进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS），即第二向电泳;在IEF中，蛋白质因等电点不一样而被分离;在SDS.PAGE中，不一样分子量蛋白质相互间被分离开，再用考马斯亮兰或银染进行检测［3］ ，经Pdquest等软件对结果进行比对、解析。 【双向电泳技术应用过程中关键步骤