弓形虫与猪巨噬细胞的互作特征以及FASⅡ和磷酸转运在虫体生长中的生理功能.pdfVIP

弓形虫与猪巨噬细胞的互作特征以及FAS Ⅱ和磷酸转运在虫体生长中的生理功能 目录 中文摘要 i Abstract iii 缩略语表 vi 1 文献综述1 1.1 弓形虫生活史1 1.2 弓形虫的危害1 1.3 抗弓形虫感染的免疫应答研究3 1.4 弓形虫对宿主细胞的入侵与修饰5 1.5 弓形虫免疫逃避机制7 1.6 弓形虫在宿主细胞内的营养物质合成与转运研究8 1.6.1 弓形虫脂肪酸代谢研究8 1.6.2 弓形虫转运蛋白研究9 2 研究目的与意义 11 3 材料与方法12 3.1 实验材料12 3.1.1 实验动物12 3.1.2 虫株、细胞和菌株12 3.1.3 载体与质粒12 3.1.4 引物13 3.2 主要仪器与试剂17 3.2.1 主要仪器17 3.2.2 主要试剂盒17 3.2.3 主要试剂18 3.2.4 主要试剂的配制18 3.3 实验方法19 3.3.1 细胞传代培养19 3.3.2 细胞及虫株的冻存及复苏20 3.3.3 互作转录组测序样品的收集20 I 华中农业大学2020 届博士研究生学位论文 3.3.4 转录组样品文库构建及测序21 3.3.5 测序数据分析21 3.3.6 基因组DNA 提取方法23 3.3.7 RNA 提取及反转录24 3.3.8 荧光定量qRT-PCR 分析转录组差异基因25 3.3.9 连接产物的转化25 3.3.10 质粒提取26 3.3.11 切胶回收目的DNA 片段26 3.3.12 CRISPR/Cas9 质粒的构建27 3.3.13 具有同源臂重组质粒的构建28 3.3.14 弓形虫基因敲除虫株的构建28 3.3.15 间接免疫荧光29 3.3.16 弓形虫复制实验30 3.3.17 空斑实验31 3.3.18 弓形虫入侵检测31 3.3.19 弓形虫逸出检测31 3.3.20 CCCP 抑制剂对弓形虫体外生长影响的检测32 3.3.21 小鼠毒力实验32 3.3.22 荷虫量检测32 3.3.23 酵母试验33 4 结果与分析35 4.1 互作转录组测序及分析35 4.1.1 获得高质量的RNA 样品35 4.1.2 获得高质量的测序数据36 4.1.3 测序序列具有较高的比对率37 4.1.4 生物学重复样品间具有较高的相关性38 4.1.5 差异基因分析及