白细胞分类计数(手工法).docxVIP

东莞常平医院 临床检验实验室 文件编号： DGCPH-CL-SOP-07-04 白细胞分类计数（手工法） 版序： 2005-1 页码：第 1 页，共 5 页 [ 测定原理 ] 把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，用复合染料构成的染色液染色，血片中 的细胞由于内容物不同， 而被染成不同的颜色， 根据各类白细胞形态特征予以分类计数，得相对比值（百分率） ，以观察数量﹑形态和质量的变化，对疾病有辅助诊断意义。 [ 试剂及仪器 ] （一）染色液 1. 瑞氏—姬姆萨复合染色液 I 液 取瑞氏染粉 lg 、姬姆萨染粉 0.3g ，置洁净研钵中，加 2 ML 丙三醇和少量甲醇 ( 分析纯 ) ，研磨片刻，吸出上层染液。再加少量甲醇，继续研磨，再吸出上清液。如此连续几次，共用甲醇 500ml。收集于棕 色玻璃瓶中，每天早、晚各振摇 3min，共 5 天，以后存放一周即能 使用。 Ⅱ液 pH6.4 —6.8 磷酸盐缓冲液 磷酸二氢钾 ( 无水 )6.64g磷酸氢二钠 ( 无水 )2.56g 加少量蒸馏水溶解，用磷酸盐调整 pH，加水至 1000ml。 2 ．快速染色液 I 液: 磷酸二氢钾 6.64g磷酸氢二钠 2.56g 水溶性伊红 Y 4g( 或伊红 B2.5g)蒸馏水 1000ml 石炭酸 40ml 煮沸，待冷备用。 Ⅱ液 亚甲蓝 4g 蒸馏水 1000m1蒸馏水 1000m1高锰酸钾 2.4g 煮沸，待冷备用。 东莞常平医院 临床检验实验室 文件编号： DGCPH-CL-SOP-07-04 白细胞分类计数（手工法） 版序： 2005-1 页码：第 2 页，共 5 页 3 ． 30s 快速单一染色液 贮存液 瑞氏染粉 2.0g 姬姆萨染粉 0.6g天青 E 0.6g 甘油 10.0ml 聚乙烯 D比咯烷酮 (PVP) 20.0g ( 或曲拉通 X-100 3ml) 甲醇 1000ml 磷酸盐缓冲液 (pH6.2-6.8)磷酸二氢钾 6.64g磷酸氢二钠 0.26g石炭酸 4.0ml 蒸馏水加至 1000ml 应用液 l 液、 2 液按 3：1 比例混合放置 14 天后备用。 （二）显微镜。 （三）计数器。 [ 标本的采集 ] 取手指血或静脉血  1.0ml ，置于抗凝管中（ 2%EDTAK2）摇匀待检。或直接未梢 取血涂成血片。 [ 操作步骤 ] 1 ．采血后推制厚薄适宜的血膜片，血膜应呈舌状，头  . 体. 尾清晰可分。 2 ．推好的血膜在空气中晃动，以促使快干。天气寒冷或潮湿时，应于 37 C 温 箱中保温促干，以免细胞变形缩小。 3 ．染色： （1）. 瑞氏—姬姆萨复合染色液染色 置玻片于染色架上， 滴加染液 3—5 滴，使其迅速盖满血膜， 约 1min 后，滴加缓冲液 5 一 10 滴，轻轻摇动玻片或对准血片吹气， 与染液充分混和， 5一 10min 后用水冲去染液，待干。 东莞常平医院 临床检验实验室 文件编号： DGCPH-CL-SOP-07-04 白细胞分类计数（手工法） 版序： 2005-1 页码：第 3 页，共 5 页 （2）．快速染色液染色 把干燥血片浸入快速染色液的  I 液中 30s，水洗，再浸入Ⅱ液 30s， 水洗待干。 注：本染色法除了能快速用于急症外，对玻片质量要求也不高。随着染 液多次使用，可适当延长染色时间或更换新液。 （3）．30s 快速单一染色液染色 将染液铺满血膜或将血片浸入染色缸内， 30s 后用自来水冲洗。 注：加表面活性剂 PVP 可增加染料的溶解度并起稳定作用， 加入天青 E 可缩短染色时间。 4 ．选择涂片的体尾交界处染色良好的区域， 在油镜下计数 100 个白细胞，按其 形态特征进行分类计数，求出各类细胞所占比值（百分率） 。 [ 参考范围 ] 中性杆状核粒细胞（ N）： 1-5% 中性分叶核粒细胞（ N）： 50-70% 嗜酸性粒细胞（ E）：0．5-5% 嗜碱性粒细胞（ B）：0-1% 淋巴细胞（ L）：20-40% 单核细胞（ M）：3-8% [ 临床意义 ] （1）中性粒细胞（ N） 中性粒细胞具有游走性和吞噬作用。 增高见于： a ．急性感染和化脓性感染：肺炎、败血症、脓肿等。 b ．组织损伤：大手术后、心肌梗塞、肺梗塞等。 c ．恶性肿瘤：急、慢性白血病、淋巴瘤等。 d ．各种中毒：尿毒症、糖尿病酸中毒等。 减少见于： a ．某些传染病：流感、伤寒、付伤寒、麻疹。 b ．某些血液病：再障、粒细胞缺乏症、白细胞减少症。 c ．化疗或放疗后，抗癌药物， X 线及镭照射。 d ．其它：脾功能亢进，自身免疫性疾病，高度恶