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质粒 DNA中量试剂盒性能检验流程 抽检方式 从每批次生产的成品中抽取1‰样品进行检验，如该批次生产的产品少于 1000 盒， 抽取一盒作外观组成及性能检验。 检验要求 2.1 试剂 试剂种类，规格，数量与说明书相符。 2.2 塑料耗材 塑料耗材种类，规格，数量与说明书相符。 2.3 使用性能要求 2.3.1 对于从同一种样品提取的 DNA，以标准试剂盒作为对照，两者回收 DNA的质量差别 ≤± 10％。 2.3.2 对于从同一种样品提取的 DNA，以※ BIO-RAD试剂盒 作为对照， 两者 DNA的得率差别 ≤± 10％。 2.3.3 纯度要求： 纯化后的 DNA的 A260／ 280 的比值应处于 1.80 ± 0.15 ，电泳条带清晰无拖尾。 2.3.4 纯化后的 DNA测序成功率达到 80％以上 , 测序峰形清晰的长度大于 500 个碱基 。 BIO-RAD 试剂盒： BIA-RAD plasmid Midi Kit. 试验方法： 3.1 至少取送检的三次产品，对照的标准的试剂盒三次产品作检测。 3.2 按 ※说明书操作步骤 操作，分别用检验试剂盒与对照的标准试剂盒提取 DNA， 最后用 300 ul 洗脱液洗脱 DNA。 3.3 测 OD 从检验试剂盒与对照的标准试剂盒提取的 DNA中分别取出部分测 OD，计算 DNA的得率和 A260／ 280，并进行比较分析。结果要求符合 3.4 酶切 根据所测得的 OD，分别从检验试剂盒与对照的标准试剂盒提取的 DNA中取出 1 ug ，加 入 ECOR I 1 ul 、 10× H2 ul 以及去离子水定容到 20 ul 体系， 37OC酶切 1h。 3.5 电泳 3.5.1 制作 1.0 ％琼脂糖凝。 A．称取 1.0g 琼脂糖凝胶，倒入 250ml 的三角烧瓶中，加入 100 ml 的 1×TAE电泳缓冲 液，混匀后置于微波炉中“组合烧烤” 2档加热 1分钟 30秒。 B．将三角烧瓶取出，轻轻摇晃三角烧瓶使溶液混匀，再置于微波炉中“组合烧烤” 2 档加热 30 秒。 C．将三角烧瓶取出，用自来水冲洗三角烧瓶外壁，并轻轻摇晃三角烧瓶，当凝胶冷却 至不烫手时加入 5μl 10mg/ml 的 EB（溴化乙锭）溶液，轻轻摇晃混合均匀。 D．向胶床上倒入凝胶，注意平均地将凝胶分配到各 4 个格子中，如发现气泡必须去除。 插上梳子，等待凝胶凝固。 3.5.2 取样 在等待凝胶凝固的时间里准备下述工作： 在 ※ 96V 型底板 1－ 14 孔中每孔加入 2μl上样 缓冲液，在 2－13 中分别按顺序加入用检验的试剂盒和对照的试剂盒提取的 DNA 8 μl 和它们相应的酶切液 8 ul 在第 1 孔和第 14 孔分别加入 5.6 μl未纯化的 1Kb DNAMarker 和 100 bp DNA Marker 作为对照（注意特别在第 1、 14 孔中补加 2.4 μl去离子水以确  ， 保电泳时上样总体积为 10 μl ）。结果要求符合 3.5.3 点样电泳 按顺序对应在凝胶上的 1－14 上样孔中加入步骤 2）中 96V型底板 1－ 14孔准备好的 DNA， 50 伏电泳 30 分钟。紫外灯下目测清洁后的 Marker 的回收率， 拍摄图片并目测估算两批 产品间回收的 DNA的得率上的差别。 100bp DNA Marker ： Axygen 公司产品。 1Kb DNA Marker ： Axygen 公司产品。 说明书操作步骤详见附件。 96V 型底板： Axygen 公司产品。 判定规则 抽检和型式检验发现不合格项， 可再抽取三盒试剂盒进行检验， 如果新抽取的三盒均检验合格， 判定该批产品为合格产品。 三盒产品中只要有一盒以上的产品检验为不合格的，则判定该批产品为不合格产品。