【国自然】人类重要病原体致病机制研究.docxVIP

项目名称： 人类重要病原体致病机制研讨 首席科学家： 金奇 我国疾病防备操控中心病毒病防备操控所 起止年限： 依托部分： 卫生部 一、研讨内容 本课题研讨环绕病原体变异及变异与致病性的联系这个盛行症根底研讨中的中心科学问题，别离针对乙型肝炎病毒、艾滋病毒和肠道病原菌的生物学及致病特色展开相关研讨。 一、乙型肝炎病毒遗传学特征及其致病和致癌相关性研讨 本项目首要研讨内容包含：（1）剖析我国HBV基因型及重组体的散布特色以及与疾病谱和抗病毒医治应对的联系；（2）研讨HBV蛋白和细胞因子相互效果的生物学功用，讨论HBV感染、致病和致癌机理；（3）研讨抗原特异性免疫在乙肝发病与转归中的效果及其网络调控机制。 1．剖析我国HBV基因型及重组体的散布特色以及与临床疾病谱和抗病毒医治应对的联系 （1）HBV遗传变异及其分子盛行病学研讨 （2）病毒要素、宿首要素、核苷相似物抗病毒医治应对相关性研讨 首要包含：①不同HBV基因型肝安排病变的特色，HBV基因型与临床疾病谱和HBeAg血清学转化的联系，基因型与抗病毒医治应对的联系；②比较研讨纯种C和D基因型以及咱们判定的D/C重组体三种毒株的临床分子病毒学特色；③将重组体的重组区域与纯种基因型原位置换，运用转染细胞系研讨D/C重组体与纯种C和D基因型对病毒仿制和抗原表达的影响；隔阂共转染遗传布景不同的细胞系，研讨有无毒株挑选优势；④在体系剖析不同基因型和重组体基因组学特色的根底上，优化和改善现有HBV基因分型办法，提出新的基因分型体系。 2． 研讨HBV蛋白和细胞蛋白相互效果的生物学功用，讨论HBV感染、致病和致瘤的分子机理 （1）树立以杆状病毒为载体的HBV感染新技能渠道，挑选与HBV感染相关的细胞因子及其功用性研讨 （2）研讨与HBV病毒仿制、转录、病毒颗粒安装相关的基因在HBV病毒日子周期中的功用 （3）探求HBV感染的受体和辅佐受体 （4）别离、判定与HBx蛋白相互效果的新细胞蛋白 （5）与HBx相互效果蛋白因子的表达差异研讨 （6）超表达HBx蛋白及其相互效果细胞蛋白对细胞生理功用的和HBV病毒的影响 （7）按捺与HBx蛋白相互效果蛋白表达后对细胞生理活性和HBV病毒的影响 （8）在试验动物水平HBx蛋白及其相互效果蛋白的功用性研讨 运用Bac-to-Bac杆状病毒真核表达体系，构建含有完好HBV基因组的重组杆状病毒。运用该重组病毒感染不同肝细胞，挑选一个或几个适宜的细胞系作为研讨HBV的分子生物学和药物的挑选的渠道。运用杆状病毒能转导不同的肝细胞的特性，运用Microarray剖析重组HBV感染前后细胞的转录谱，结合差减文库来挑选与HBV感染相关的基因。选用蛋白质二维电泳、质谱，结合蛋白质组学和噬菌体展现文库，最新的安排表达蛋白或许DNA芯片等现代生物学技能别离并判定HBV感染相关的受体和辅佐受体。 选用酵母双杂交体系挑选和差异表达文库剖析等办法，寻觅与HBx蛋白相互效果的细胞蛋白，研讨HBx蛋白与其相互效果细胞蛋白对细胞凋亡、细胞转化、增殖等生物学功用。在细胞和安排水平上剖析HBx蛋白相互效果细胞因子的表达差异，研讨新的相互效果细胞因子的生物学功用。HBx蛋白与激活的ras、Myc等肿瘤因子相互效果对细胞转化以及试验动物致瘤性的影响，并凭借现代分子生物学、细胞生物学、分子病毒学技能说明HBx蛋白及其相互效果的细胞蛋白对细胞凋亡、成长特性等的影响效果途径，深化讨论HBV致病和致癌的分子机制。 3．研讨抗原特异性免疫调理T细胞在病毒性肝炎发病与转归中的效果及其网络调控机制 （1）我国旱獭嗜肝病毒急、缓慢感染模型的树立 （2）我国旱獭嗜肝病毒模型在HBV感染相关疾病研讨中的实践运用 （3）运用小鼠模型研讨特异性Tr细胞包含DN Tr在调理机体产生适度的免疫反响以铲除肝炎病毒、反抗感染中的效果和效果机制 （4）CD4或CD8淋巴细胞耗尽后对MHV-3所形成的重症肝炎炎性反响的影响 （5）特异性Tr 包含DN Tr 的MHV-3抗原特异性免疫维护效果和机制 （6）研讨特异性Tr细胞包含DN Tr在乙型肝炎发病中的效果、机制及运用 （7）特异性Tr 和DN Tr 的HBV抗原特异性免疫维护效果和机制 拟树立旱獭嗜肝病毒动物模型，不只价格便宜且简单取得，适宜在我国推行运用，并且该动物模型是树立在崇高认可的土拨鼠模型的根底上，能得到崇高同行的认可和承受。因而这种适宜我国国情的经济适用的嗜肝病毒动物模型的树立，不只将为研讨HBV感染的发病机制和挑选适宜的抗病毒药物和医治性疫苗供给很好的技能渠道和研讨东西，并且将大幅度进步我国在HBV感染相关疾病研讨上的全体水平。 本部分还将进行下述研讨：①运用小鼠模型研讨特异性Tr细胞包含DN Tr在调理机体产生适度的免疫反响以铲除肝炎病毒、反抗感染中的效果和效果机制