【国自然】肿瘤的糖化学生物学前沿研究(2).docxVIP

项目名称： 肿瘤的糖化学生物学前沿研讨 首席科学家： 叶新山 北京大学 起止年限： 2012.1-2016.8 依托部分： 教育部 一、要害科学问题及研讨内容 拟处理的要害科学问题： 本项目环绕发现肿瘤功用相关糖链这一方针, 拟处理如下要害科学问题： 肿瘤相关糖链探针的可取得性问题跟着糖化学生物学、糖组学和糖类药物研讨的快速打开，对糖类化合物样品品种和量的需求大幅度添加。怎么快速、很多地获取高纯度的糖类化合物便成为糖科学研讨中最重要的根底性问题之一。关于糖类化合物而言，由于存在糖型、多功用团润饰、分枝、端基异构等多种要素的影响，使得其结构变得杂乱和多样。又由于自然界中糖类化合物存在着微观不均一性，寡糖类化合物一般具有高极性和出色的水溶性，并且在肿瘤细胞等安排中含量极低，所以在现在技能水平下，企图选用别离手法从生物资料中直接获取组分均一、结构清晰的糖链非常困难。此外，糖类化合物不是基因操控的直接产品，它的组成并不是有模板的仿制，除受酶基因表达的调控外，还受酶活性的影响，所以糖链组成也不能像核酸和蛋白质那样可选用扩增办法和表达手法进行。因而，怎么处理糖类化合物的可取得性问题，是以它为探针探究糖链在肿瘤中的功用首先要面对的一个要害问题。本项目拟打开糖链的高效组成办法，并以此为根底采纳体外化学组成和生物组成的途径组成肿瘤功用相关的糖链，为糖链在肿瘤中的生物学功用及干涉调控研讨供给分子探针。 2．糖链在肿瘤细胞及其微环境中的改动规则及其功用机制肿瘤是机体细胞失掉对其成长的正常调控而构成的新生物，是细胞本身调控和其所在的微环境彼此效果的效果。其间，细胞外表和其所在的微环境中很多糖链润饰改动以及凝集素受体功用反常在肿瘤产生打开和搬运进程中发挥极其重要的效果。糖链组成的调控以及糖链与凝集素的彼此效果参与了肿瘤生物学行为的各个方面，研讨和说明糖链结构及凝集素受体的改动规则和调控机制是提醒肿瘤的生物学行为的一个重要方向。糖基化润饰是蛋白质功用的一个更高层次的调理机制，单从基因、蛋白质的水平提醒肿瘤产生机制是远远不够的，有必要从糖链的视点愈加全面地知道糖链在肿瘤中的效果，发现肿瘤中糖链的改动规则和调控机制，从而为肿瘤的确诊医治供给新战略。因而，运用糖化学生物学研讨的理念，经过对糖链结构特征、调控糖链组成的糖基搬运酶和完结糖链功用的凝集素受体打开系统研讨，阐释肿瘤中糖链的改动规则和调控机制是咱们要面对的另一个要害问题。本项目拟以人肺癌、肝癌、乳腺癌和宫颈癌作为研讨方针，研讨肿瘤相关糖链在肿瘤中的表达、结构、功用特征及其调控规则，挑选和判定肿瘤的特征性糖链，为肿瘤确诊和医治的研讨供给新战略和新靶点。环绕要害科学问题，本项意图首要研讨内容可分化为如下四个方面：1．糖链探针的化学组成研讨近年来化学生物学的迅猛打开为运用化学小分子探针了解生命进程供给了新的机会。化学组成办法是现在取得纯的结构确认的糖类化合物的首要途径。本课题将以肿瘤中特异性N-糖链和O-糖链的特征糖链为靶标，规划寡糖探针分子，打开寡糖化学组成的新办法和新战略，以它们的高效组成乃至主动化组成为导向，完结寡糖链的快速而高效的拼装，构建肿瘤特异性糖链探针化合物库。另一方面，肿瘤中糖链的反常与糖链加工酶（糖苷酶和糖基搬运酶）的活性反常直接相关；因而，本课题拟规划和组成与肿瘤相关的糖链探针，为肿瘤相关的糖链功用研讨供给化学东西，并从而发现抗肿瘤药物先导化合物。2．糖链探针的生物组成研讨由于糖类化合物结构的杂乱性，糖链特别是具有杂乱结构的细胞外表糖链的组成在某些情况下单纯依托化学的办法难以完结或组成难度增大。跟着生物技能的打开，越来越多的寡糖链可经过微生物或酶法得以组成。为了探究糖链在肿瘤中的生物学功用和机制，需求组成具有结构多样性的寡糖链探针分子。可是，寡糖链及其衍生物的生物组成还面对着许多瓶颈问题：一是自然界不存在的单糖衍生物难以取得，从而使规划出的寡糖衍生物没有相应的单糖质料组成；二是参与糖链组成的天然糖基搬运酶专注性强，无法运用非自然界存在的单糖衍生物组成糖链；三是糖苷酶组成寡糖的产率低。本项目拟构建含稀有糖单元的糖库及其糖核苷酸库，并对糖链组成相关糖基搬运酶和糖苷酶进行分子改造以拓宽糖基搬运酶对糖底物的挑选性和进步糖苷酶的区域挑选性和产率，树立一套生物法组成寡糖及其衍生物的完好办法，为研讨肿瘤相关糖链的功用供给探针样品，从而为进一步研讨开发肿瘤医治疫苗或许药物奠定根底。3. 糖链对肿瘤细胞生物学行为的影响及机制研讨糖基搬运酶催化组成糖链，糖链经过润饰衔接到蛋白质或脂类分子上，生成糖蛋白或糖脂而发挥功用。功用糖组学的研讨分道扬镳证明，与正常细胞和安排相比较，肿瘤细胞和安排表达特征的糖蛋白糖链和糖基搬运酶。因而，提醒肿瘤特征的糖基搬运酶与糖蛋白及糖蛋白糖链之间的特定靶向润饰联系