【国自然】要病毒的入侵机制研究.docxVIP

项目名称： 重要病毒的侵略机制研讨 首席科学家： 胡勤学 中国科学院武汉病毒研讨所 起止年限： 2010年1月-2014年8月 依托部分： 中国科学院 一、研讨内容 【拟处理的要害科学问题】 以冠状病毒科、黄病毒科和疱疹病毒科中的代表病毒HCoV-HKU、JEV和HSV为首要研讨方针，经过对I、II、III型病毒侵略机制的比较研讨，发现其共性或规则，为规划相对广谱的抗病毒侵略药物供给新思路，是病毒病防治的严重需求。本项目将会集处理如下要害科学问题： 病毒包膜蛋白-细胞受体彼此效果的分子机制。 病毒包膜蛋白变构诱导病毒-细胞膜交融的机理及其按捺。 其学术内在包括： 1、HCoV-HKU、JEV等的侵略受体没有承认 冠状病毒HCoV-HKU的侵略受体没有承认；黄病毒JEV、疱疹病毒HSV在不同细胞上能够与不同细胞外表分子结合，但有些仅仅吸附因子而不是侵略受体。发现HCoV-HKU、JEV的细胞受体及研讨受体的分子辨认机制关于研讨病毒包膜蛋白与细胞受体彼此效果、病毒内化及病毒膜-细胞膜交融的分子机制等具有重要意义。而且，说明这些科学问题将有助于提醒HCoV-HKU、JEV、HSV为代表的I、II、III型包膜病毒的侵略机制及规则，并为药物规划和新式疫苗研制供给科学依据和打破口。 2、HCoV-HKU、JEV、HSV病毒内化和病毒-细胞膜交融的机制仍不清楚 HCoV-HKU、JEV和HSV病毒内化、病毒膜与细胞膜交融等进程的分子机制均不清楚。除以上共性问题外，有待答复的问题还包括：（1）HCoV-HKU：尚无HCoV-HKU灵敏细胞系；HCoV-HKU S 蛋白的激活办法及介导病毒侵略途径不清晰；HCoV-HKU S 蛋白的抗原特性及病毒中和抗体表位尚有待研讨。（2）JEV：对包膜蛋白中决议细胞、安排嗜性和毒力的相关位点不清晰；对JEV侵略初始靶细胞、侵略抗原提呈细胞及侵略血脑屏障的分子机制均不清楚。（3）HSV：其侵略是经过4个病毒包膜蛋白gB、gD、gH、gL与细胞膜或内体膜蛋白彼此有序的协同效果完结的。gD 是首要的受体结合蛋白，是HSV侵略的重要决议因素。虽然其胞外结构域晶体结构分道扬镳解析，但对受体挑选运用的机制依然了解甚少；gB有或许在交融中起要害效果，但仅有gB是不能完结HSV膜交融的；gH、gL在所有疱疹病毒中高度保存，而且对病毒的侵略与膜交融是必需的；现在对病毒侵略进程中gB、gD、gH、gL怎么协同效果还不清楚。 3、HCoV-HKU、JEV、HSV包膜蛋白与受体互作的结构根底和侵略按捺仍是未知范畴 HCoV-HKU S 蛋白、JEV E 蛋白和HSV gB、gD、gH、gL蛋白是病毒侵略的要害蛋白，除对gD、gB胞外结构域晶体结构进行了解析外，对HCoV-HKU S 蛋白、JEV E 蛋白和HSV gH、gL蛋白的结构仍不了解，也尚无针对HCoV-HKU、JEV、HSV的侵略按捺剂。提醒以上包膜蛋白与受体互作的结构根底将为药物和疫苗规划供给抱负的靶位点。 【研讨内容】 1、病毒的细胞受体及受体介导的内化 1.1、HCoV-HKU侵略受体、靶细胞侵略途径的研讨 因为短少细胞培育模型，HCoV-HKU侵染和致病机制的研讨遭到很大的限制。咱们将经过树立多种假病毒系统，结合膜蛋白荧光差异2D技能剖析A549、NIH-3T3等细胞膜蛋白的差异点，用符号及磁珠免疫共沉淀的办法，寻觅与冠状病毒S蛋白和/或与其粘附相关的分子（如HLA-Cw0702）彼此效果的病毒细胞受体或辅助因子，并承认这些蛋白的功用及与S蛋白彼此效果办法。 包膜病毒结合相应受体后，能够直接和细胞膜交融（如HIV），也能够经内化后与胞内体进行膜交融（如流感病毒，HIV）。有些冠状病毒选用直接膜交融途径，而有些冠状病毒选用胞内体膜交融途径。本课题将对HCoV-HKU的膜交融途径进行翔实的研讨。 1.2、JEV病毒受体分子的发现与承认 JEV能够感染多种细胞系，咱们将归纳选用生物化学和病毒学办法，针对不同的细胞模型，选用亲和纯化、cDNA文库或表型缺失文库来进行挑选性的挑选。隔阂，将经过受体重建等多种途径和办法来承认所发现的病毒受体分子的功用特征。 1.3、JEV 侵略中枢神经系统的分子机制 JEV是具有代表性的脑炎病毒，且有老练的细胞和动物模型，咱们拟以已有的JEV强、弱毒株为形式病毒，在动物模型上，从体内层面研讨病毒内化途径和诱导神经损害的信号传递机制，以期提醒JEV的致病机理，为解析其它脑炎病毒如西尼罗河病毒等相似科学问题供给参阅。 1.4、PI3K信号在HSV侵略中的效果 PI3K信号通路能影响多种细胞内的转运进程，包括物质分选、小泡构成（包括自噬体构成）和运送、膜交融等，在埃博拉病毒、流感病毒等的内化及仿制进程中起重要效果。咱们将研讨PI3K-Akt信号