【国自然】诱导多能干细胞（iPS）及其分化发育研究.docxVIP

项目名称： 猪诱导多能干细胞（iPS）及其分解发育研讨 首席科学家： 刘林 南开大学 起止年限： 2009.1至2013.8 依托部分： 天津市科委 教育部 一、研讨内容 拟处理的要害科学问题 讨论猪iPS的重编程机制，使用猪作为动物模型全面点评iPS的安全性、有用性是本项目拟处理的要害问题。 iPS在小鼠和人上的成功获取，将干细胞范畴的研讨带到了一个簇新的年代，为生命科学的未来打开带来了新的曙光。但是，iPS仍存在许多的不确认安全隐患，有用性也有待证明，在小鼠、人之外的其它物种上尚没有报导，仍处于打开的起步阶段，还不能直接谋福于人类，这归根到底是人们对其科学根底--细胞的重编程进程及其机制缺少系统深化的了解。我国人口增长压力大、出世缺点多、老龄化加重，人们对优质畜产品日益增长的需求和畜牧业打开滞后、牲畜良种偏少、当地物种遗传资源丢失严峻之间的对立日益突出，是我国遵循可持续打开、全面建造和谐社会所面对的严峻应战。处理这些国家严重需求问题，必定要求咱们对以iPS、ES为代表的多能性干细胞技能进行深化研讨。 根据iPS、ES等多能性干细胞在研讨人正常胚胎发生、非正常发育、发现组成药物和胚胎缺点检测及作为细胞置换、器官移植和基因治疗，优质牲畜种类培育、濒危动物维护等方面具有重要的参阅、使用价值。本研讨拟使用猪这一模型，要点处理如下问题： 确认猪iPS重编程的要害基因及其组合 经过挑选能诱导出猪iPS的转录因子组合以及直接使用现有在小鼠和人iPS上成功的诱导因子组合，从而得到猪iPS系。然后再对猪iPS系与惯例天然胚来历的猪ES系在多方面进行比较，检测经过诱导终末分解体细胞发生的猪iPS终究和ES之间在获取功率，细胞形状、增殖特征、细胞外表特异性标志物、基因表达及表观遗传学状况上有多大类似和差异，关于深化知道去分解/分解机制很有协助； 2 查验猪iPS系生殖系搬运的才能 能否成功参加嵌合体各类型细胞的发生，尤其是能否参加构成生殖系细胞，是衡量多能性干细胞发育才能的一个重要规范。因而，本项目拟将诱导获取的猪iPS和惯例猪ES注入到正常2倍体或4倍体囊胚腔内，检测、剖析iPS是否参加嵌合体各类细胞，尤其是种系生殖细胞的构成；作为点评多能性干细胞发育才能更为谨慎的办法，嵌合体发育对知道iPS的多能性、点评iPS安全性等方面十分要害，也对人类iPS具有十分重要的参阅价值。 3 研讨iPS进步克隆胚的发育的才能，查验其安全性 已有研讨标明，多能性干细胞做供核时，克隆功率高、子孙存活率高、变形率低。以iPS为供核打开克隆，测验进行转基因、基因组润饰克隆猪制备，以培育成长功能好、环境友好型、质量优异的家猪新种类，人类心血管疾病模型及为人类异种器官移植供给供体。因而，此项研讨将不只有助于进步克隆功率，制备转基因猪，还会有助于咱们更直接地了解iPS的安全性，为牲畜良种培育及人类再生医学供给重要参阅根据。 4 研讨猪体细胞重编程成为iPS的分子机制 分解的体细胞可以经过体细胞克隆、与胚胎干细胞交融、卵母细胞提取物共培育等办法发生不同程度的去分解，其间最首要的重编程事情有端粒的康复以及表观遗传学重编程（如DNA甲基化、X-染色体失活、组蛋白润饰、染色质重塑等）。研讨标明，重编程过错或许不彻底，会直接影响体细胞能否彻底康复发育全能性，会约束上述技能的推广使用。因而，作为最新被树立起来能使分解的体细胞发生去分解的手法，iPS在构成进程中的重编程事情，如端粒和表观遗传学润饰的重编程是否正常，也将直接影响iPS全能性是否彻底康复。了解这些事情，不只能丰厚咱们对细胞分解/去分解机制的知道，也将能促进咱们对人iPS安全性、牢靠性和使用的研讨。 首要研讨内容 环绕着处理上述要害科学问题，要点处理猪iPS系诱导要害因子组合挑选、组合、诱导战略、诱导后发育潜能检测剖析；比较猪iPS系与ES系之间生物学特性的异同，深化比较体细胞核移植与iPS这两种细胞重编程的机制、功率；测验使用猪iPS、ES这些多能性干细胞进步核移植功率，制备一般的、转基因或许基因组润饰的克隆猪（如人类心血管疾病模型、异种器官移植器官供体猪等），探究已分解体细胞端粒和表观遗传重编程致去分解的规则及作用机制。因而，本项目拟在课题组已有备的基因克隆与剖析渠道、干细胞别离建系渠道、嵌合体制备与剖析渠道、转基因和基因组润饰技能渠道、细胞核移植（克隆）渠道、细胞重编程事情检测剖析渠道等根底上，要点研讨：1）猪iPS系诱导要害基因挑选和技能系统树立；2）猪iPS体内、体外的分解发育潜能及猪iPS的使用；3）猪iPS在构成期间的重编程的规则与机制。 1. 猪多能性干细胞特异因子的分子生物学研讨 ① 比较猪体细胞与前期胚胎、成体干细胞基因表达差异，取得猪干细胞特异因子； ② 克隆猪多能性干细胞特异因子的编码基因； ③ 构建