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组织培养实验有关试剂的配制:
MS培养基储备液的配制
成分
1升储备液用量
(mg)
每升培养基取用量
(ml)
20*储备液1 (大暈元素)
NH4NO3 kno3
CaCl2.2H2O
MgSO4.7H2O
KH2PO4
33000
38000
8800
7400
3400
50
200*储备液2 (微量元素)
KI
h3bo3
MnSO4.4H2O
ZnSO4.7H2O
Na2MoO4.2H2O
CuSO4.5H2O
CoC12.6H2O
166
1240 4460 1720
50
5
5
5
200*储备液3 (铁盐)
FeSO4.7H2O
Na2.EDTA.2H2O
5560
7460
5
200*储备液4 (有机成分) 肌醇
烟酸
盐酸毗哆醇
盐酸硫胺素
甘氨酸
20000
100
100
20
400
5
次氯酸纳消毒液:取30ml次氯酸纳溶液,用蒸憾水定容至100ml。现配现用。
75%的酒精:75ml的95%的酒精加水定容至95讷。
0.2%的升汞溶液:称取
0.2%的升汞溶液:
称取HgC12 20克,
加蒸懈水至4000mlo
IN盐酸:取8.25ml的浓盐酸,加蒸憾水定容至100ml。
INNaOH:称8g NaOH,用蒸啊水定容至200mlo
0.1mg/mI的2,4?D溶液:取25mg的2,4-D,加入少量95%的酒精和1N的NaOH 溶解,再加蒸耀水定容至250mlo
0.1mg/ml的6-BA溶液:取25mg的6-BA,用少量1N的盐酸溶解,再加蒸镭 水定容至250ml□
遗传转化与GUS基因检测的试剂配制
LB培养基的配制:
将下列组分溶解在0.9L水中:
蛋白月东
log
酵母提取物
5g |
氯化钠 1
IOg
如果需要用INNaOH (10?15ml)调整pH至7.0,再补足水至1L
10ml的10mmol/l的AS (乙酰丁香酮)母液(100x)配制:称19.6mg的AS, 先溶于少量甲醇屮,然后慢慢加蒸锚水定容至10ml,过滤除菌,分装成200ul/ 管(每组1管),使用时将200ul的AS母液加入20ml的MS液体培养基中。
50mmol/l的磷酸钠缓冲液(pH 7.0): A液:取3.l2g溶于蒸饴水, 定溶至lOOmlo B液:JRNa2HPO4.12H2O7溶于蒸镭水,定溶100ml。取A 液39ml与B液61ml混合,定容至400ml,调PH至7.0。
50mmol/L铁氤化钾母液:称3.295g,用蒸馆水定容至200ml
50mmol/l亚铁氨化钾母液:称4.224g ,用蒸镭水定容至200ml。
0.5mol/l EDTA 母液(pH8?0):
药品
分子量
100ml
500ml
EDTA Na2 2H2O
372.24
18.6g
93.06g
双蒸h2o
80ml
400ml
用NaOH调PH至8.0
6g
IOg
DdH2O定容至
100ml
500ml
GUS检测液的配制:lOOmgGluc,先溶于1ml的DMF。取80ml 50mmol/l的磷 酸钠缓冲液(pH 7.0),加入1 ml 50mmol/L铁氧化钾、Iml50mmol/L亚铁氧化钾 和2ml 0.5mol/l EDTA (PH 8.0),再加入已溶解的Glue,再加20ml的甲醇,混 匀。(配制方法参考《现代植物生理学实验指南》p348)
将配好的GUS检测液分装于1.5ml的小管屮(1ml/管,1组1管),-20° C保 存备用。
鲜花保鲜施氧物歧化酶活性测定
50mmol/l的磷酸钠缓冲液(pH 7.0):
A: NaH2PO4.2H2O3.12g 溶于蒸镭水,定溶至 100ml。
B液:Na2HPO4」2出0 7」7g溶于蒸饰水,定溶至100ml。
取A液39ml与B液61ml混合,定容至400ml□ PH7.0。
50mmol/I的磷酸钠缓冲液(pH 7.8):
取A液8?5ml与B液91.5ml混合,定容至400mlo PH7.8。
SOD 提取液:50 mmol/L 磷酸缓冲液[含 0. lmmol/L EDTA; 0. 3%(w/v) Triton X-100; 4% (w/v)聚乙烯聚毗咯烷酮(pvpp, polyvinylpolyrrolidone) , pH7. 8] pvpp比较难溶,多晃动儿次,再静置一会,慢慢就会溶解。
14.5 nnnol/L dl-甲硫氨酸:即2. 163克/L,称2. 163g,用蒸憾水定容至1L (较 难溶,需稍微加热)。
3umol/L EDTA: 每 500ml 中加 3ul0. 5mol/L 的 EDTA 母液,用 50 mmol/L 磷酸缓 冲液配制。
2. 25mmol/L NBT (1. 84 克/L):称 0. 092 克,溶于
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