组织培养实验有关试剂的配制.docVIP

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组织培养实验有关试剂的配制: MS培养基储备液的配制 成分 1升储备液用量 (mg) 每升培养基取用量 (ml) 20*储备液1 (大暈元素) NH4NO3 kno3 CaCl2.2H2O MgSO4.7H2O KH2PO4 33000 38000 8800 7400 3400 50 200*储备液2 (微量元素) KI h3bo3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoC12.6H2O 166 1240 4460 1720 50 5 5 5 200*储备液3 (铁盐) FeSO4.7H2O Na2.EDTA.2H2O 5560 7460 5 200*储备液4 (有机成分) 肌醇 烟酸 盐酸毗哆醇 盐酸硫胺素 甘氨酸 20000 100 100 20 400 5 次氯酸纳消毒液:取30ml次氯酸纳溶液,用蒸憾水定容至100ml。现配现用。 75%的酒精:75ml的95%的酒精加水定容至95讷。 0.2%的升汞溶液:称取 0.2%的升汞溶液: 称取HgC12 20克, 加蒸懈水至4000mlo IN盐酸:取8.25ml的浓盐酸,加蒸憾水定容至100ml。 INNaOH:称8g NaOH,用蒸啊水定容至200mlo 0.1mg/mI的2,4?D溶液:取25mg的2,4-D,加入少量95%的酒精和1N的NaOH 溶解,再加蒸耀水定容至250mlo 0.1mg/ml的6-BA溶液:取25mg的6-BA,用少量1N的盐酸溶解,再加蒸镭 水定容至250ml□ 遗传转化与GUS基因检测的试剂配制 LB培养基的配制: 将下列组分溶解在0.9L水中: 蛋白月东 log 酵母提取物 5g | 氯化钠 1 IOg 如果需要用INNaOH (10?15ml)调整pH至7.0,再补足水至1L 10ml的10mmol/l的AS (乙酰丁香酮)母液(100x)配制:称19.6mg的AS, 先溶于少量甲醇屮,然后慢慢加蒸锚水定容至10ml,过滤除菌,分装成200ul/ 管(每组1管),使用时将200ul的AS母液加入20ml的MS液体培养基中。 50mmol/l的磷酸钠缓冲液(pH 7.0): A液:取3.l2g溶于蒸饴水, 定溶至lOOmlo B液:JRNa2HPO4.12H2O7溶于蒸镭水,定溶100ml。取A 液39ml与B液61ml混合,定容至400ml,调PH至7.0。 50mmol/L铁氤化钾母液:称3.295g,用蒸馆水定容至200ml 50mmol/l亚铁氨化钾母液:称4.224g ,用蒸镭水定容至200ml。 0.5mol/l EDTA 母液(pH8?0): 药品 分子量 100ml 500ml EDTA Na2 2H2O 372.24 18.6g 93.06g 双蒸h2o 80ml 400ml 用NaOH调PH至8.0 6g IOg DdH2O定容至 100ml 500ml GUS检测液的配制:lOOmgGluc,先溶于1ml的DMF。取80ml 50mmol/l的磷 酸钠缓冲液(pH 7.0),加入1 ml 50mmol/L铁氧化钾、Iml50mmol/L亚铁氧化钾 和2ml 0.5mol/l EDTA (PH 8.0),再加入已溶解的Glue,再加20ml的甲醇,混 匀。(配制方法参考《现代植物生理学实验指南》p348) 将配好的GUS检测液分装于1.5ml的小管屮(1ml/管,1组1管),-20° C保 存备用。 鲜花保鲜施氧物歧化酶活性测定 50mmol/l的磷酸钠缓冲液(pH 7.0): A: NaH2PO4.2H2O3.12g 溶于蒸镭水,定溶至 100ml。 B液:Na2HPO4」2出0 7」7g溶于蒸饰水,定溶至100ml。 取A液39ml与B液61ml混合,定容至400ml□ PH7.0。 50mmol/I的磷酸钠缓冲液(pH 7.8): 取A液8?5ml与B液91.5ml混合,定容至400mlo PH7.8。 SOD 提取液:50 mmol/L 磷酸缓冲液[含 0. lmmol/L EDTA; 0. 3%(w/v) Triton X-100; 4% (w/v)聚乙烯聚毗咯烷酮(pvpp, polyvinylpolyrrolidone) , pH7. 8] pvpp比较难溶,多晃动儿次,再静置一会,慢慢就会溶解。 14.5 nnnol/L dl-甲硫氨酸:即2. 163克/L,称2. 163g,用蒸憾水定容至1L (较 难溶,需稍微加热)。 3umol/L EDTA: 每 500ml 中加 3ul0. 5mol/L 的 EDTA 母液,用 50 mmol/L 磷酸缓 冲液配制。 2. 25mmol/L NBT (1. 84 克/L):称 0. 092 克,溶于

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