酶工程-第十节-酶与现代生命科学.pptVIP

2021/3/17 * ? 限制酶的保质期 一般是在检定日以后的一年内,但几乎所有的限制酶在超过保质期后都不会急剧失活, 因此购入后即使是经过长时间保存的酶, 也完全可以使用,但这些酶在使用前最好再测一次活性。另外,保存酶时即便让其冻结,大部分酶也不会急剧失活。 2021/3/17 * EcoRI 2021/3/17 * PstI 2021/3/17 * SmaI return 2021/3/17 * 研究酶的理化性质及其作用原理,对于阐明生命现象的本质和规律具有十分重要的意义（包括酶的结构功能、酶与代谢调节、酶与生物的生长、发育、进化、疾病等） 。 从酶分子水平去探讨酶与生命活动、与代谢调节、与疾病、生长发育等等的关系,对阐明某些生命活动的本质和规律,无疑也具有十分重要的意义。 二、酶是生命科学研究的重要对象 2021/3/17 * ? 同功酶 同工酶(isoenzyme)是指催化的化学反应相同,而酶蛋白的分子结构、理化性质乃至免疫学性质不同的一组酶,存在于生物的同一种属或同一个体的不同组织、甚至同一组织或细胞中。 目前已发现有150多种酶具有同工酶,如6-磷酸葡萄糖脱氢酶、乳酸脱氢酶、酸性和碱性磷酸酶、谷丙转氨酶和谷草转氨酶、肌酸磷酸激酶、核糖核酸酶、过氧化酶和胆碱酯酶等。其中,发现最早,研究最多的是乳酸脱氢酶（LDH）同工酶. 2021/3/17 * 例:LDH同工酶的两种亚基以不同比例组成五种四聚体:LDH1(H4)、LDH2(H3M)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)和LDH5(M4)。 Dogfish LDH M4结构图 2021/3/17 *  同功酶与物种进化 ? 同工酶是生物进化过程中为适应愈趋复杂的代谢而引起的一种分子进化,以适应不同组织或不同细胞器在代谢上的不同需要. ? 同功酶在各器官和组织中的分布不同。这样就可以根据同工酶酶谱差异并配合其它方法从分子水平探讨物种进化、遗传变异等一些生命现象。 2021/3/17 * 在正常情况下血清中同功酶谱是相对稳定的。当某一组织或器官发生病变时,就有某种特殊的同工酶释放出来,引起血清中同功酶活性的改变。对病人及正常人同工酶电泳图谱进行比较,有助于上述器官疾病的诊断。 在临床上已应用同工酶做诊断指标,例如: 冠心病及冠状动脉血栓引起的心肌受损者血清中LDH(H4)及LDH2(MH3)含量增高; 而肝细胞受损患者血清中LDH5(M4)增高。 2021/3/17 * 同功酶与其它 同工酶的研究不仅在临床血液病、肿瘤及其它疾病的诊断方面占有重要地位,而且在分子遗传学、物种鉴定、法庭取证、亲子鉴定、优生优育等领域中也具有广阔的应用前景。 2021/3/17 * ? 肿瘤的酶异常 肿瘤酶异常原因: 1、肿瘤过多或过少产生酶 2、肿瘤阻塞了酶通过的导管系统 3、肿瘤诱导酶产生 4、细胞通透性改变使可溶性酶进入血液循环 2021/3/17 * 临床诊断还没有单一指标可确诊癌, 所以酶测定可作为一种辅助手段,如: 测定血清淀粉酶——胰腺癌 酸性磷酸酶——前列腺癌 亮氨酸氨肽酶、硫酸酯酶、乳酸脱氢酶等同工酶谱变化———肝癌、结肠癌、直肠癌。 2021/3/17 * 端粒酶 端粒、端粒酶与肿瘤发生的关系是近年来肿瘤研究领域的热点之一。有研究表明,端粒酶在85%～95%的恶性肿瘤组织中有阳性表达,而在正常体细胞则一般为阴性。因此端粒酶抑制剂的研究为恶性肿瘤的早期诊断、预后估计及基因治疗开辟了一个新的途径。 2021/3/17 * 端粒(telomere) 真核细胞染色体末端以 TTAGGG 6个碱基序列重复组成的DNA结构 人体细胞染色体端粒长度约为5～15Kb,其功能在于保护染色体免受核酶降解,防止断端融合重排或降解。如果端粒长度缩短到极限如4Kb以下时,细胞则会丧失分裂增殖能力而发生凋亡,该过程称为监控点激活(checkpoint activation)。 端粒缩短被认为是正常细胞分裂与老化的分子信号,端粒被称为细胞寿命的“分裂钟”。 2021/3/17 * 端粒的保护机制 在真核细胞,端粒DNA的富G链较富C链超出约12～16bp,形成3′端的突出单链结构,而端粒蛋白质能够特异地识别这一突出区域并与之结合,再通过进一步的折叠、盘曲,从而形成染色体末端具有保护功能的“帽子”,在防止染色体互相融合、重组等方面都发挥着十分重要的作用 2021/3/17