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白族药西归中阿魏酸的含量测定 西归 （seselopsis） 是伞形科属植物西藏凹乳芹 （Vicatiathibetica deBoiss） 的根，凹乳芹属植物全球约 5 种， 产于印度、巴基斯坦、尼泊尔和中国，在中国主要分布于云南西 北部、四川西部及西藏等地，在云南大理有少量栽培。在滇西北 及川西，民间用它作中药当归的代用品，称为西归 （大理） 、独脚 当归（马尔康 ） 。据研究报道西归中化学成分有阿魏酸、 伞形花内 酯、佛手柑内酯、芹菜素、胡萝卜苷等，通过动物实验证明西归 与人参一样具有明显抗疲劳、 抗缺氧和耐热作用， 具有较高的开 发价值。 西归中有关成分的含量测定未见报道， 本实验采用高效 液相色谱法对西归中阿魏酸的含量进行测定， 为进一步建立西归 药材的质量标准奠定基础。 仪器与试剂 Agile nt 1100 高效液相色谱仪，包括 G1315 B DAD检测 器，G1313AALS自动进样器，Agile nt 1100色谱工作站（美国安 捷伦科技XX公司）；梅特勒电子天平 AE240（瑞士）； SZ-97自动 三重纯水蒸馏器（上海亚荣生化仪器厂）；DZKW-4水浴锅（上海科 析实验仪器厂 ）；甲醇（色谱纯 ） 、磷酸（分析纯 ）、水（重蒸馏纯净 水） 、阿魏酸对照品 （中国药品生物制品检定所 ） 、西归直接从产 地收集，并由大理学院药学院生药学教研室马晓匡教授鉴定。 方法与结果 色谱条件 色谱柱：Agile nt ZORBASBC18(4.6 x 150mm 5卩m),流动相：甲醇-0.1 %磷酸水溶液(体积比为30:70)，流 速：1.0ml /min，柱温：30C，检测波长：320nm.进样量：10ul。 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的阿魏酸对照 品5.05mg。置50ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度， 作为储备液。 2.3提取溶剂的选择 精密称取5份样品，每份约1g,分别 精密加入甲醇、乙醇、乙酸乙酯、石油醚、乙醚 10ml,称重， 超声提取30min，冷却补重，按2.1项条件进行测定，结果见表 1。 从上表可以看出甲醇提取率最高,故采用甲醇。 2.4 提取方法选择 根据 2.3 项的结果采用甲醇作提取溶 剂，称取样品3份，每份约1g,分别用回流提取、超声提取、 索氏提取进行考察,结果见表 2。 从上表可以看出回流提取效果最佳, 故采用回流提取法。 2.5 提取时间的选择根据 2.3 的结果采用甲醇作提取溶剂, 称取样品 5份，每份约1g,用回流提取法提取1h、1.5h、2h、2.5h、3h, 结果见表 3。 从上表可以看出 2h 后,提取率不再发生改变,所以采用 2h 提取西归中的阿魏酸比较合适。 2.6供试品溶液的制备 精密称取研磨成80?100目的西归 试样1g,于100ml磨口烧瓶中，精密加入甲醇 10ml，加热回流 2h,放冷至室温，甲醇补重，摇匀，用 0.45卩m微孔滤膜过滤. 即为供试品溶液。 线性关系的考察 取 2.2 项中制备好的阿魏酸对照品储 备液2ml于10ml容量瓶中，用甲醇稀释并定容，即得质量浓度 为 0.0202mg／ml 的对照品溶液。按 2.1 项色谱实验条件 . 取 0.0202mg／ml 的对照品溶液， 2、4、8、10、14、16、20u1 分别 进 3 次，测定阿魏酸的峰面积值，以进样量 (ug) 为横坐标，色谱 峰峰面积为纵坐标作图，得回归方程： y=3069.3X+3.8794 ， r=0.9999，结果表明进样量在 0.0404?0.404ug范围之间线性关 系良好。 精密度试验和稳定性试验 精密吸取阿魏酸对照品溶液 (0.0202mg /ml),按选择的色谱条件连续进样 6次，其峰面积的 RSD为0.31 %，表明仪器精密度较好。取同一样品液，每隔 1h 进样 1 次，每次 10ul ，测定峰面积，结果表明样品液在 6h 内稳 定(n=6)，阿魏酸峰面积的 RSD为1.63 %。 重现性试验 精密称取烘干至恒重的西归粉末 (100 目)5份，每份1g。按“供试品溶液的制备”进行平行提取，在 选定色谱条件下测定阿魏酸的含量， RSD为1.80 %,分析结果表 明重现性较好。 回收率试验 精密称取已知含量的西归粉末 (100 目 )5 份,分别精密加入一定量的阿魏酸储备液, 照 2.5 项下方法操作, 进行回收率测定,结果见表 4。 2.11 样品的测定 取六批样品制备成供试液，按上述色谱 条件进行分析， 按外标法计算阿魏酸的含量。 西归中阿魏酸含量 为124.58ug /g（n=2）。西归与阿魏酸对照品的 HPLC色谱图见图 1。 讨论 有关西归的研究报道很少， 其化学成分的含量测定均未见报 道。本实验通过提取溶剂、提取方法、提取时间的选择，确立西