9总论第II部-遗传变异的创造-第九章-细胞融合2-原生质体培养.pdf

111 第九章 植物原生质体培养和细胞融合 （续） 2 9-2 原生质体培养 3 5 原生质体培养前必须调到一定密度，一般10 ～10 /mL 的密 度比较适合原生质体培养。 3 原生质体的培养方法各种各样，依作物和材料来源而异。平 板培养、液体浅层培养、悬滴培养、液、固双层培养、琼脂糖 包埋、看护培养等是原生质体培养常用的方法。 4 但不管哪种培养方法，在培养过程中，都应根据细胞生长情况 不断降低渗透压。待肉眼可见的细胞团形成后，便可转移到普 通细胞培养基上进行细胞繁殖和分化工作。 5 影响原生质体培养的因素很多，物理条件如密度、光照和温 度等都会影响培养效果。低于一定密度原生质体不能分裂，一 般认为大群体的原生质体有利于将培养基中原生质体在培养过 程中释放的有害物质脱毒。 6 原生质体培养一般在暗处进行，有利于壁形成和细胞再生， 有的物种一直在暗处直到形成愈伤组织，有的一周后移到光下。 照光与否以及什么时候照光，光强如何，均直接影响着植板率。 7 植板率的计算公式如下： 植板率 = 形成小愈伤块个数/接种时细胞总数×100% 8 原生质体培养一般在22～25度进行，高、低温都有害。但 有的植物要求27～30度，在25度时不能形成愈伤组织。 9 原生质体比细胞需要更复杂的培养条件，有时需要在有饲 养层细胞的情况下原生质体才能再生。培养基的无机营养和有 机营养组成都对培养效果有显著影响。选择适当的渗透压对于 获得大量原生质体并保持其活力均很重要，一般用甘露醇或山 梨醇调节渗透压。 10 在培养过程中一般需降低渗透压以促进分裂。对于琼脂糖 包埋培养，可将其切成小块，转移到低渗的液体培养基中漂浮 培养，液体培养则可加入低渗的一定体积的培养基，但一般每 一步降低程度不超过25%。 11 现在一个趋势是将蔗糖或葡萄糖单独使用或与甘露醇结合 作为稳定剂，一旦糖被降解，培养基渗透压降低，利于细胞分 裂。 12 生长素对于早期培养壁的形成是需要的，最常用的是2， 4—D，有时需要生长素与分裂素结合使用。生长素的使用量一 定要小心确定，因为它很易使液胞长大或增加新液