例谈微生物的培养与分离实验重点.docxVIP

例谈微生物的培养与分别实验 中学生物学实验的基本技术主假如显微镜的操作、 临时装片的制作和微生物培养的基本技术等， 其中显微镜的操作、 临时装片的制作是初中生物学教学的要求，而微生物培养的基本技术则是高中生物学教学的基本任务。 高三生物（选修）教材共四个学生实验， 其中两个是对于微生物培养的基本技术和微生物的分别提 纯，可见微生物培养的基本技术在高中教学中的地位，在高考命题以能力立意、 重视实验考察的今天，使学生掌握微生物培养的基本技术，更有特其他意义。 为此，笔者在实验教学实践中结合选修教材实验二、实验三和高校微生物学教程， 编写两道微生物实验习题， 旨在使学生掌握微生物培养的基本技术， 学会微生物分其他一般方法，并对两例作简要剖析，供大家参照。 例一：下面两段材料介绍了两种筛选微生物的方法： 方法一： 19 世纪后期， Robert koch 创造了用琼脂制作固体培养基，成功地将混淆地生活在一同的微生物进行了分别和提纯。他先将微生物样品稀释，用接种针沾少许稀释菌 液在固体培养基上划线接种，恒温培养后从培养基表面精选相同特点的某一种菌落，经过几次相同的培养过程，便可将其分别、提纯。 请你模拟方法一，将表层土壤中的圆褐固氮菌与其余杂菌分别，并提纯出其中某一种圆褐固氮菌。 你选择的实验材料和用具有：已消毒的培养皿若干、接种针一支、酒精灯、无菌水、 表层土壤样品，还有 ① ； 你实验的操作步骤是： （一）分别圆褐固氮菌： （1）样品的稀释： ② ； （2） ③ 。 （二）提纯某一种圆褐固氮菌： （ 1）样品的稀释： ④ ； （2） ⑤ 。 方法二： 20 世纪中期， J.lederberg 夫妇创造了影印平板培养法用于筛选具有抗性的 微生物。他们用灭菌后的丝绒布包裹在小的木质圆柱体外（外形似印章） ，让末端均匀沾满 待筛选的菌种，然后将“印章”先后影印在普通培养基和选择培养基上，影印时保持印章的相对位置严格的对应性。经恒温培养后，通过比较培养基上生长的菌落，便可获得某种抗性的微生物。 本文共 4页 第1页 请你模拟方法二， 用含四环素的选择培养基将不具抗四环素抗性的大肠杆菌筛选出来。 你选择的实验材料和用具有：已灭菌的“印章” 、已消毒的培养皿若干、标签纸、含四 环素的选择培养基、大肠杆菌母液，还有 ⑥ ； 你实验的操作步骤是： （一）用“印章” 影印接种后培养： ⑦ ； （二） ⑧ 。 [ 能力要求 ] 培养学生创造能力是素质教育首要任务，而模拟是创造的初步。 本题旨在考察学生阅读剖析、 理解办理材料的能力； 同时在对前人科研模拟的基 础上，应用试题赐予的知识解决新问题的创造能力。 [ 解题指导 ] 在第 1 小题中，要剖析 Robert koch 分别和提纯某种微生物的方法：他先将微生物样品稀释， 用接种针沾少许稀释菌液在固体培养基上划线接种，恒温培养后从培养基表面精选相同特点的某一种菌落，经过几次相同的培养过 程，便可将其分别、提纯。然后根据圆褐固氮菌能自生固氮的特点，配制无氮培 养基，先将其与其余不能固氮的微生物分别； 再从中精选相同特点的某一种菌落进行培养，以达到提纯某一种圆褐固氮菌的目的。 在第 2 小题中，要理解 J.lederberg 夫妇创造了影印平板培养法是一种间接筛选具有某特点的微生物的方法。 他们用“印章”先后影印在普通培养基和选择培养基上， 影印时保持印章的相对位置严格对应， 通过比较两种培养基上生长 的菌落，便可获得实验需要的微生物。 然后根据不具有抗性的大肠杆菌在普通培养基可以生长， 而在选择培养基不能生长的特点， 便能筛选出不具有抗性的大肠 杆菌。试题的难点是间接筛选，而不是直接选择出具有抗性的大肠杆菌。 [ 参照答案 ] ①灭菌后的无氮固体培养基 ②将表层土壤样品加无菌水稀 释，备用 ③接种后恒温培养：将接种针在酒精灯的外焰上灼烧，冷却后沾少 许表层土壤样品稀释液， 在火焰旁于灭菌后的无氮固体培养基上划线接种， 置于250C恒温箱中培养一周。 在培养基表面生长的菌落便是能自生固氮的圆褐固氮菌 ④用接种针从生长的菌落中精选相同特点作为再次提纯的样品， 加无菌水稀释备 用 ⑤接种后恒温培养：方法同③，经几次相同的培养过程，便可将其分别、 提纯得到某一种圆褐固氮菌。 ⑥普通固体培养基 ⑦用“印章” 沾大肠杆 菌母液先后影印在普通培养基和选择培养基上， 影印时保持印章的相对位置严格 对应，影印后置于 250C 恒温箱中培养一周 ⑧筛选后取样接种：用接种针挑 选在普通培养基上可以生长而在选择培养基对应位置上不能生长的菌落， 配成母 本文共 4页 第2页 液再按上述方法影印接种，便可得到不具抗性的大肠杆菌。 例二： 了研究 菌 青霉素抗 性形成的机理，有人 了如下 方案： （一）取培养皿 A 若干 (