基因编辑技术.docxVIP

基因编辑技术 III This manuscript was revised by JIEK MA on December 15th, 2012. 现代科技作业 姓名：马涛涛 专业：计算机系（一班） 基因编辑技术 一简介 基因编辑技术指能够让人类对日标基因进行“编辑”，实现对特定DNA片段的敲除、加入等. 利用该技术，可以精确地定位到基因组的某一位点上，在这位点上剪断靶标DNA片段并插入新的 基因片段。此过程既模拟了基因的自然突变，又修改并编辑了原有的基因组，权正达成了 “编雅 基因。 现代基因组编辑技术的基本原理是相同的.即借助特异性DNA双链断裂（DNA double-srrand breaks DSB s）激活细胞天然的修負机制，包括非同源末端连接（NHEJ）和同源重组修复（HDR）两条 途径。 非同源末端连接（NHEJ）是一种低保真度的修复过程，断裂的DNA修复重连的过程中会发生 碱基随机的插入或丢失,造成移码突变使基因失活，实现目的基因敲除。如果一个外源性供体基因序 列存在，NHEJ机制会将其连入双链断裂DSB位点，从而实现定点的基因敲入。 定点大右段JB騰同源重组修其（HR）是--种相对髙保貞?度的修复过程.在一个帯有同源臂的重组供体存在的情 况下，供体中的外源目的基因会通过同源重组过程完整的整合到靶位点，不会岀现随机的碱基插入 或丢失。如果在一个基因两侧同时产生DSB,在一个同源供体存在的情况卜L可以进行原基因的替 换。 定点大右段JB騰 5- r y 3, 定点k段替换 ^~rm niii 11111 rnr\ 图1基因组编辑原理示意图 基因编辑技术的种类 目前主要有3种基因编辑技术，分别为： 人工核酸酸介导的锌指核酸（zinc- finger nucleases. ZFN）技术; 转录激活因子样效应物核酸(transcription activator- like effector nucleases. TAKEN)技术； RNA 引导的 CRISPR- Cas 核酸酶技术(CRISPR- Cas RGNs) o 表1不同基因组编辑技术比较 ZFN TALEN CRISPR 识别模式 蛋白质.DNA 蛋白质?DNA RNA.DNA 识别长度 (3-6) x 3 x 2 hp (12-20) x 2 bp 20 hp 识别序列特点 以3 hp为单位 5前一位为T 3’序列为NGG 特异性 较高 一般 一般 构建难易 难度大 较容易 容易 细胞毒性 大 较小 较小 四基因编辑技术的应用前景 基因功能研究 基因敲除是在活体动物上验证基因功能必不可少的逻辑环节，但是传统的基因敲除方法需要通 过复杂的打靶载体构建、ES细胞筛选、帙合体动物模型选育等一系列步骤.成功率受到多方而 因素的限制。 即使对于技术比较成熟的实验室.利用传统技术敲除大鼠或小鼠身上的某个基因一般也需要1 年以上。基因编辑新技术则不然，敲除基因高效快速，是研充基因功能的有力工具。 ZFN技术己在大鼠、小鼠、斑马鱼、果蝇、拟南芥、玉米、烟草等模式生物或经济物种的细胞 或胚胎中以及包括诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells. iPSC)在内的人体外培养细 胞系中成功地实现了内源基因的定点突变，其中在果蝇、斑马鱼、大鼠等物种中还获得了可以稳定 遗传的突变体。 2009年，威斯康诉医学院、Sangamo Biosciences、Sigma- Aldrich等多家机构使用ZFN 技术，成功培有岀首只靶基因敲除的大鼠，而且带有该突变的大鼠所生育的后代同样带有该基因突 变。 基因治疗 传统的基因治疗是将正常的基因片段引入细胞中替代有缺陷的基因，但这种方法难以精准控 制，可能产生很大的毒副作用。基因编辑新技术可以精确定位，在靶位点进行修正或进行基因切 除，达到基因治疗的目的. Bacman等人利用TALEN技术清除了来自于病人线粒体内的有病DNA，这是TALEN首次应用于 线粒体基因的编辑，这项研究有望用于治疗母系遗传的线粒体病。 Li等人利用ZFN技术能在染色体上精确定位的优势，通过“剪切”和“粘贴”基因，在丈 验小鼠体内实现了血友病治疗，避免了传统基因疗法带来的插入诱变风险，首次取得了基因组编 辑在基因疗法上的突破。 构建模式动物 根据人类疾病所构建的动物模型，对研究这些疾病的发生及其治疗有着重要意义。基因打靶技 术是在ES和同源重组技术的基础上发展起来的，模型构建耗时长、成本髙.旦模式动物的选择受 到ES细胞的限制。 基因编辑新技术不受ES细胞的限制?效率高?速度快?且定点编辑更加精确，可在多种细胞及生 物体的特定位点进行切割和修饰。构建转基因小鼠第一人Jaenisch与其同事最近利用CRISPR- Cas系统又构建了携带特