动物细胞工程课件 PPT.pptxVIP

动物细胞工程;学习导航 1、 简述动物细胞的培养过程。(重难点) 2、举例说出细胞融合与单克隆抗体的制备。(重难点) 3、关注克隆技术的伦理问题。(重点) ;;2、动物细胞培养与组织培养的相同点 (1)条件:将动物细胞或组织在_________、____________与营养充足的条件下培养。 (2)目的:使其接着生长、繁殖并维持___________________的技术过程。;3、动物细胞培养与动物组织培养方法的主要区别 (1)动物细胞培养过程中需要用___________ 等使组织块中的细胞离散。 (2)动物组织培养过程中不需要使用_______________等。 ;4、培养过程 (1)原代培养是指从供体获取组织或细胞后的_________培养。 (2)传代培养是指将___________的细胞分离稀释后转入新的培养瓶中接着培养。 (3)一般情况下,传代培养___________后,细胞增殖会明显缓慢,甚至完全停止。 ;想一想 动物细胞培养如何检测有毒物质毒性的大小？ 提示:用含有一定浓度有毒物质的细胞培养液与正常细胞培养液同时培养正常细胞,通过对比观察变异细胞的百分数来确定其毒性强弱。 ;二、细胞核移植与动物体细胞克隆 1、动物体细胞克隆 (1)概念:将供体体细胞的_________与受体去核卵细胞的细胞质进行___________,借助于_________的发育能力,经过培养发育成胚胎进而形成__________的技术。 (2)关键技术:_______________技术。 ;2、细胞核移植:是一种利用显微操作技术将某种动物的细胞核移入同种或异种动物的去除细胞核的成熟____________内的技术。 三、细胞融合与单克隆抗体 1、细胞融合 (1)概念:指在一定条件下将_____________细胞融合为_________细胞的过程。 ;(2)促进细胞融合的方法:主要有_________ (如电激法)、化学法(如用___________作为诱导剂)与生物法(如用灭活的____________作为诱导剂)。目前物理法融合效率较高,且对细胞伤害小,易操作、控制与观察,在实验室被广泛使用。 (3)最重要的用途:制备______________。 ;2、单克隆抗体制备的基本原理 单个的效应B淋巴细胞只能产生________抗体,骨髓瘤细胞具有____________的能力,若将小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞相融合,首先形成________细胞,随后该细胞通过多次增殖形成一群如此的细胞,这些细胞即可产生大量的__________抗体。 ;判一判 (1)动物体细胞克隆的动物核遗传物质来源唯一(√) (2)核移植的供体与受体一定是同一物种(×) (3)鼠的单克隆抗体能用于人体疾病的治疗(×) ;;(2)营养:细胞体外培养所需营养物质与体内的环境基本相同。例如,需要有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。将细胞所需的上述营养物质按其种类与所需数量严格配制而成的培养基,称为合成培养基。在使用合成培养基时,通常需加入血清、血浆等一些天然成分。 ;(3)温度与pH:细胞体外培养的适宜温度一般与动物的体温相近,哺乳动物多以36、5±0、5 ℃为宜。多数细胞生存的适宜pH为7、2～7、4。 (4)气体环境:细胞培养所需气体主要有O2与CO2,O2是细胞代谢所必需的,CO2的主要作用是维持培养液的pH。 ;特别提醒 (1)细胞培养过程还需要无毒环境。在细胞培养液中添加一定量的抗生素,以防培养过程中的污染。应定期更换培养液,以便清除代谢产物,防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害。 (2)气体环境。进行细胞培养时,通常采纳培养皿或松盖培养瓶,将其置于含95%空气加5% CO2的混合气体的培养箱中进行培养。 ;2、培养过程 (1)原代培养 ①材料:动物早期胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织,因为这些组织或器官中的细胞分化程度低,生命力旺盛,分裂能力强。 ②过程:直截了当从动物体内取出的组织块,用胰蛋白酶使其分散成单个细胞,然后转入培养瓶中进行培养的过程。 ③应用:适合药物测试、基因表达的研究。 ;(2)传代培养 原代培养到一定程度,空间会变小,营养会减少,而且细胞会出现接触抑制,假如还需要接着进行细胞培养,就要用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离下来,重新形成悬浮细胞,分装到多个培养瓶中接着培养。 ;(3)培养流程图 ;;(1)肝脏切成小薄片,这有利于肝脏细胞___________________________________。 (2)气室中充入5%CO2气体的主要作用是___________________________________。 (3)培养液中添加抗生素是为了抑制细菌生长,但要注意选择抗生素的________,以保证抗生素对肝脏无