放射免疫分析技术.pptVIP

谢谢观赏 谢谢观赏 放射免疫分析技术 〔Raaadioimmunoaaassaaay，RIA〕 * 谢谢欣赏 2021-5-18 核医学 治疗：肿瘤、甲亢等 诊断 体内——PET、SPECT、 放射免疫成像等 体外——放射免疫分析〔RIA〕 * 谢谢欣赏 2021-5-18 标记免疫分析技术 用标记示踪技术观察抗原抗体一级反响的分析方法 特点：敏感性高，反响时间短，可用仪器检测结果 三大标记免疫分析技术：放射免疫、荧光免疫、酶免疫 检测方法 检测范围 生化、常规免疫 mg~μg〔10-3 ~10-6 g〕 荧光免疫、酶免疫 μg~ng〔10-6 ~10-9 g〕 放射免疫、发光免疫 ng~pg〔10-9 ~10-12 g〕 PCR pg~fg〔10-12 ~10-15 g〕 * 谢谢欣赏 2021-5-18 一、放射免疫分析技术〔Raaadioimmunoaaassaaay，RIA〕 女科学家 R.Yaaalow〔美,1921~〕1950’末 创造〔胰岛素〕，1977年获诺贝尔医学奖 1. 根本原理 〔1〕竞争结合分析：Ag + Abbb ? AgAbbb *Ag + Abbb ? *AgAbbb 〔2〕IRMA〔免疫放射分析〕： 2. 常用标记核素： 〔1〕125I： γ 射线，半衰期 60 天 〔2〕3H： β 射线，半衰期 12.3 年 3. 测量仪器 〔1〕γ 计数仪 〔2〕β 液闪仪 * 谢谢欣赏 2021-5-18 4. 根本试剂 〔1〕标准品与质控品 aaa. 意义：放射免疫定量分析的尺度、质量控制的依据 bbb. 要求： 化学结构上——与待测物有相同的化学结构 化学纯度上——对竞争反响有干扰的杂质的含量低 含量准确 注意不变质与降解：在运输、保存时尤应注意；注意有效期 c. 种类：国际标准、国家标准、企业标准 * 谢谢欣赏 2021-5-18 〔2〕标记物 aaa. 对标记物的要求 比活度高：即单位物质的放射性强度高 生物活性及免疫活性与标记前改变小 放射化学纯度高：应 95% 稳定性好：标记的同位素不易脱落 * 谢谢欣赏 2021-5-18 bbb. 标记方法： 氯胺-T 法：最常用的 125I 标记法，I 与酪氨酸共价结合，方法简便，但易造成蛋白质的损伤 乳过氧化酶法： Iodogen〔氯甘脲〕法：固相法，标记率较高，损伤小，反响时间长 置换法： 3H 最常用 c. 标记产物的纯化：常用 Sephaaadex 层析，也可用硅胶 G 薄板层析或 HPLC 别离 d. 标记产物的鉴定：常用 RIA 法 最大结合百分率 标准曲线比较法 e. 半抗原的标记：必须先连接载体，常用牛血清白蛋白〔BSA〕，再对载体作标记 * 谢谢欣赏 2021-5-18 〔3〕特异性结合抗体 aaa. 对特异性结合抗体的要求： 亲和力〔aaaffinity〕高：指单个抗体分子与抗原决定簇特异结合的能力，用 K 值表示，反映灵敏度 特异性高：与待测抗原的结合力高，而与待测抗原类似物的结合能力〔交叉反响〕低 滴度〔效价〕高：指结合 50% 标记抗原时抗体的稀释度高 稳定性好：能长期保存，化学性质、效价稳定 bbb. 抗体的制备 选择适宜的免疫动物：兔、鼠、羊 应用佐剂：福氏完全佐剂与不完全佐剂〔羊毛脂、石蜡油 +卡介苗〕 选择适宜的免疫方法：剂量、接种途径〔腹股沟、腋窝、脊柱两侧皮内多点〕、间隔时间〔加强〕与次数 * 谢谢欣赏 2021-5-18 c. 抗体的纯化 去除杂抗体：用抗原吸附法 提取特异性 IgG：先用盐析法粗提，再用离子交换层析或亲和层析纯化 d. 抗体的鉴定 鉴定内容：效价、亲和力、特异性 鉴定方法：效价〔琼脂单扩〕、特异性〔琼脂双扩〕、RIA e. 单克隆抗体的使用： 用于 IRMA 或 RIA，特