PCR产物的酶切鉴定结果分析和表述 .docxVIP

PAGE PAGE 1 PCR产物的酶切鉴定结果分析和表述 CaMV35S启动子基因扩增产物为195bp，可以被限制性内切酶Xmn I切成大小为80bp和115bp的两个片段。详细操作为：取15μL回收的PCR产物放入酶切管中，加入1μL的限制性内切酶XmnI，再加入2μL酶切反应缓冲液，加水2μL配成20μL反应体系，在37℃恒温水浴保温反应3h。将20μL反应液与上样缓冲液混合后加入预制好的含2．5％琼脂糖凝胶的一个泳道中，然后举行电泳检测和凝胶成像分析。 结果分析和表述①假如在试样和GMO阳性对比的PCR反应中，CaMV 35S启动子、NOS终止子、CP4-EPSPS、CaMV35S启动子和叶绿体转移肽基因片段(CaMV 35S—CTP4)以及内标准lectin这5个基因都得到了扩增，且扩增片段与预期片段全都，而在GMO阴性对比中仅扩增出lectin九基因片段，空白对比中没有任何扩增片段，表白该样品为阳性结果，检出了CaMV35S启动子基因、NOS终止子基因、CaMV 35S启动子和叶绿体转移肽基因片段(CaMV35S—CTP4)、抗草甘膦基因。假如在试样和GMO阳性对比的PCR反应中，CaMV35S启动子和内标准lectin这两个基因都得到了扩增，且扩增片段与预期片段全都，而在GMO阴性对比中仅扩增出lectin基因片段，空白对比中没有任何扩增片段，在对试样的CaMV 35S启动子扩增片段的酶切鉴定中，扩增片段可以被切成80bp和115bp两个片段，表白该样品为阳性结果，检出CaMV 35S启动子基因。②假如在试样和GMO阴性对比的PCR反应中，仅有lectin基因片段得到扩增；GMO阳性对比中CaMV35S启动子、NOS终止子、CP4一EPSPS、CnMV 35S—CTP4以及lectin以基因都得到扩增；空白对比中没有任何扩增片段。表白该样品为阴性结果，未检出CaMV35S启动子、NOS终止子、CaMV 35S—CTP4、抗草甘膦基因。假如在试样和GMO阴性对比的PCR反应中，仅有zec￡in基因片段得到扩增；GMO阳性对比中CaMV35S启动子和lectin基因都得到扩增；空白对比中没有任何扩增片段。表白该样品为阴性结果，未检出CaMV35S启动子基因。③假如在试样、GMO阳性对比和GMO阴性对比PCR反应中，lectin基因片段均未得到扩增，解释在DNA模板制备或PCR反应体系中的某个环节存在问题，需查找缘由重新检测。假如在GMO阴性对比PCR反应中，除lectin基因得到扩增外，还有其他外源基因得到扩增；或者空白对比中扩增出了产物片段，则解释检测过程中发生了污染，需查找缘由重新检测。上一篇：下一篇：