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GluR1在大鼠海马结构的表达 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：GluR1在大鼠海马结构的表达 1 1材料和方法 2 文2：原百部碱在大鼠体内药动学研究 4 1 仪器与材料 5 2 方法和结果 6 3 讨论 8 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 10 正文 GluR1在大鼠海马结构的表达 文1：GluR1在大鼠海马结构的表达 0引言 αamino3hydroxyl5methyl4isoxazole propionic acid (AMPA)受体在中枢神经系统介导大多数快速兴奋性突触传递，在长时程增强（LTP）、长时程抑制（LTD）和学习记忆等方面均具有重要作用［1］. GluR1是海马神经元AMPA受体的重要组成部分, 它对于突触可塑性及空间记忆的保留是必需的［2］. 但是GluR1究竟在海马不同区域的分布特征如何，仍不清楚. 我们观察了GluR1在海马的分布，以探讨其分布与功能之间的联系. 1材料和方法 材料SD雌性大鼠6只，体质量220~260 g（由西安 交通 大学医学院实验动物中心提供），用颗粒型大鼠饲料喂养，自由饮水，动物房温度维持于(21±1)℃，光暗周期为12 h∶12 h,交替时间为7∶00 am. AMPA受体亚单位GluR1抗体购自Sigma公司，SP组化试剂盒和DAB显色试剂盒购自北京中山生物公司. 方法动物用20 g#12539;L-1戊巴比妥钠按45 mg#12539;kg-1腹腔注射麻醉后打开胸腔，经心脏快速灌注生理盐水100 mL, 再用40 g#12539;L-1多聚甲醛 (PB配制, PH ) 300 mL 灌注固定. 取全脑，修块，浸入40 g#12539;L-1多聚甲醛中后固定，4℃过夜. 用振荡切片机作冠状连续切片，片厚40 μm. 切片隔3张取1张，共4片，做漂浮染色. 反应步骤为：① mol#12539;L-1 PBS漂洗, 3×5 min； ② 3 mL#12539;L-1 H2O2处理30 min，封闭内源性过氧化物酶,然后用 mol#12539;L-1 PBS漂洗, 3×5 min；③ 10 g#12539;L-1 Triton室温孵育1 h; mol#12539;L-1 PBS漂洗, 3×5 min；④ 正常羊血清封闭，室温1 h；⑤ 兔抗GluR1抗体，4℃，72 h； mol#12539;L-1 PBS漂洗, 5×5 min；⑥ 生物素化羊抗兔抗体室温1 h； mol#12539;L-1 PBS漂洗, 5×5 min；⑦ SP复合物室温1 h; mol#12539;L-1 PBS漂洗, 5×5 min；⑧ DAB显色；⑨ 裱片，常规脱水, 透明, 中性树胶封片. 阴性对照用正常羊血清替代一抗孵育，其他步骤相同. 实验动物采用同一流程，外部条件保持基本一致. 结果判断以细胞结构呈明确的棕黄色为阳性染色. 所有阴性对照切片不着色,或仅呈淡的背景色. 2结果 大鼠脑切片上，肉眼可见两侧海马结构较其他部分染色显著增强. 光镜下GluR1在海马结构染色明显强于其他脑区,并且在海马结构的各区广泛表达，以CA3区的多形层、锥体层和透明层及齿状回门区内的中间神经元着色最深，呈棕黄色. 在CA1区，胞体呈圆形, 阳性结构主要分布在胞膜和突起(Fig 1A); 在CA3区，胞体呈椭圆或圆形, 突起长, 染色强, 阳性表达在突起、胞膜及近胞膜处的胞质均有不均匀分布，而胞核及核周的胞质未见着色(Fig 1B). 齿状回颗粒细胞排列紧密，细胞较小，阳性表达主要在胞膜和突起，而在门区的中间神经元，细胞少，胞体大，突起多，阳性表达在胞膜、胞质及突起均可见. 图1GluR1 阳性表达Fig 1GluR1 positive staining　(略) 3讨论 AMPA受体是由4种亚单位GluR1 GluR4(或GluRA GluRD)组成的异源型4聚体复合物. GluR1是AMPA受体的一个重要组成部分，对正常的快突触传递、LTP的表达及空间记忆均具有关键性的作用［3］. 在诱导LTP的强直刺激后，首先是含有GluR1的AMPA受体插入到突触后膜，随后才出现突触传递的持续增强［4］. 因此GluR1与正常突触传递、突触可塑性以及空间学习记忆均密切相关. 我们的研究结果表明GluR1在海马结构广泛表达，也提示GluR1与海马功能，如LTP的形成、空间记忆等密切相关. 本实验结果表明，GluR1在海马CA1和CA3区的表达有着明显差异，在CA1区主要表达于膜结构，而在CA3区还可在胞质表达. 研究资料显示，AMPA受体可分布于谷氨酸能突触特化区内，也可聚集于突触特化区的周