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哮喘患者特异性免疫治疗中检测NK细胞活性的意义临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：哮喘患者特异性免疫治疗中检测NK细胞活性的意义临床医学 1 1资料和方法 2 文2：对血清胸腺因子FTS提高NK细胞活性的实验研究 5 1 材料与方法 6 2 方法与结果 8 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 10 正文 哮喘患者特异性免疫治疗中检测NK细胞活性的意义临床医学 文1：哮喘患者特异性免疫治疗中检测NK细胞活性的意义临床医学 Abstract： ObjectiveTo discuss the importance of the activity of nature killer (NK) cells in the patients with asthma during immunotherapy. MethodsDetection was done respectively in 85 patients with allergy to dermatophagoides farinae and in 30 normal subjects so that their NK cell activity could be compared. Besides, all the patients and the normal subjects were treated with dermatophagoides farinae immunotherapy, before and after which their NK cell activity and IgE were detected. ResultsThe NK cell activity was less in the patients than in the normal subjects (P) and so was the total IgE level (P).ConclusionNK cells, which play a role in the process of asthma, act as a kind of important immunity regulator. Immunotherapy is helpful to strengthening NK cell activity and reducing total IgE level. Thus it may reduce the occurrence of asthma. Key words： natural killer cell; asthma; immunotherapy 尘螨过敏性哮喘为最常见的过敏性哮喘。我们采用LDH释放法检测尘螨过敏的哮喘患者在特异性免疫治疗前后外周血自然杀伤细胞（natural killer cell, NK）活性， 以探讨特异性免疫疗法中NK细胞活性的变化及意义。 1资料和方法 病例选择 选择2002年3月—2007年5月我院哮喘门诊就诊的哮喘尘螨过敏者85例进行尘螨特异性免疫治疗。其中男55例，女30例；年龄16~45岁，平均（±）岁。 所有病例均符合以下特点：（1）有典型的哮喘发作和出现症状有明显季节性与可逆性； （2）发作时可闻及哮鸣音；（3）用支气管扩张药后气喘缓解、哮鸣音消失； （4）排除慢性支气管炎及慢性阻塞性肺气肿；（5）至少有尘螨过敏且结果在++以上。 正常对照组共30例，其中男17例，女13例；年龄 16~40岁， 平均（±）岁。 两组之间的年龄、性别差异无统计学意义（P） 试验方法 尘螨过敏原皮试尘螨皮肤点刺液试剂盒购自上海旭东海普药业有限公司。 用乙醇消毒前臂掌侧皮肤， 设立阴性、阳性对照，点刺针蘸取阴性对照、阳性对照和尘螨点刺液点入前臂皮肤， 每2滴间距离不5 cm 以防止红晕互相融合。 15 min 后观察反应情况，反应比值大于阳性对照丘疹或红晕25%者为阳性。 细胞活性检测效应细胞的制备： 肝素抗凝静脉血3 ml，以PBS液2：1稀释，按常规以淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，以RPMI1640洗2次，将细胞数调至所需浓度备用。 靶细胞的配置：细胞系K652， 用含10%小牛血清的RPMI1640连续传代， 取传代1~2 d 靶细胞按效应细胞洗涤法洗涤, 最后调整细胞数至所需浓度备用。 细胞毒实验: 试验设NK试验管、自然释放管及最大释放管，用NP40（Nonidet P40， Huka AG）破坏靶细胞作最大释放， 分别加样于96孔酶表板中，37 ℃ 含5%CO2孵箱培养2 h， 然后在孔内加入LDH底物混合液（