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氧化苦参碱对小鼠局灶性脑梗死的保护作用 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：氧化苦参碱对小鼠局灶性脑梗死的保护作用 1 1 材料与方法 2 2 结 果 4 3 讨 论 4 文2：灯盏乙素对小鼠免疫性肝损伤的保护作用 5 1 材料和方法 6 2 结果 8 3 讨论 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 氧化苦参碱对小鼠局灶性脑梗死的保护作用 文1：氧化苦参碱对小鼠局灶性脑梗死的保护作用 氧化苦参碱(OMT)具有抗炎、抗氧化、抗病毒及免疫调节等多方面的药理作用〔1，2〕，一直用于病毒性肝炎及免疫调节方面的 治疗 ，但在脑血管疾病方面尚无尝试。本实验制作小鼠永久性大脑中动脉闭塞模型，观察OMT对脑梗死(CI)小鼠神经功能缺损、梗死体积、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量以及神经元凋亡的影响，探讨OMT对CI是否具有保护作用及可能机制。 1 材料与方法 实验动物与分组 健康成年雄性昆明小鼠45只，体重35～40 g，长春医学高等专 科学 校动物中心提供，随机分为假手术组、模型组及OMT预处理组，每组15只。 主要仪器及试剂 恒冷箱冷冻切片机(Leica，德国)，倒置荧光显微镜(Nikon，日本)，紫外分光光度计(CE2041，北京)。主要试剂：SOD、MDA试剂盒由南京建成生物工程研究所提供;一步法TUNEL凋亡检测试剂盒由江苏碧云天生物技术研究所提供。 模型制作及给药方法 小鼠永久性大脑中动脉闭塞模型制作 参考 文献 〔3〕。小鼠以10%水合氯醛(300 mg/kg)腹腔注射麻醉，仰卧固定，常规备皮、消毒后颈部正中切口，分离暴露右侧颈总动脉及颈内外动脉，结扎颈总动脉近心端及颈外动脉起始部，颈总动脉靠近分叉处套线备用，动脉夹暂时夹闭颈内动脉。在距离颈总动脉分叉处2 mm左右处剪一小口，插入单股尼龙线(长3 cm，直径 mm，于1、2、3处分离标记)约11 mm，有轻微阻力时停止，扎紧缝线，剪掉多余线栓，缝合并再次消毒皮肤。假手术组除不插线外，其余步骤相同。术中用白炽灯加温维持小鼠肛温约37℃。OMT为陕西慧科植物开发有限公司，纯度98%，生产批号SF，临用时以蒸馏水制成混悬液。OMT预处理组在手术前30 min腹腔注射OMT 35 mg/kg。各组小鼠均在手术后24 h处死。 观察指标 (1)神经功能缺损评分：清醒后对小鼠神经功能缺损进行评分〔4〕。0级为无神经功能缺失症状;1级为左前爪不能完全伸展;2级为轻轻向后牵拉鼠尾并将后肢提起，左前爪抓力明显减低;3级为运动自如，但牵拉鼠尾时会向左侧倾斜或转圈;4级为向左侧倾斜或划圈运动;5级为刺激后运动;6级为刺激无运动，伴有意识障碍;7级为死亡;0～7分别为0～7分。选取1～5分小鼠进行相应指标检测，每组15只。(2)红四氮唑(TTC)染色测定梗死体积：3组大鼠中每组各取5只，手术后24 h快速断头取脑，-20℃冷冻20 min后行1 mm厚冠状切片，立即置于1%TTC溶液中37℃恒温避光孵育30 min，正常脑组织为红色，梗死为白色。染色的切片经扫描后接入电脑。用ImagePro软件进行图像分析， 计算 梗死体积百分比。(3)SOD活性以及MDA含量测定：每组小鼠各取5只快速断头取脑，冰盘中分离出右侧额顶部脑组织，滤纸吸干水分，称重后制成10%组织匀浆， 4℃ 3 500 min 离心10 min后取上清液，考马斯亮蓝法测定蛋白含量，按照试剂盒说明书操作。(4)TUNEL法测定细胞凋亡：每组小鼠各取5只，术后24 h经麻醉后迅速开胸，暴露心脏，经左心室插管至升主动脉，剪开右心耳，先用 mol/L预冷PBS 100 ml灌注至清澈，再用预冷4%多聚甲醛灌注150 ml。断头取脑，37℃ 4%多聚甲醛后固定4 h，流水漂洗过夜，5%、10%、15%、20%、25%、30%梯度蔗糖脱水直至沉底，用冰冻切片机做连续冠状切片，片厚6 μm。切片经室温晾干，用含有1% Triton X 100的PBS洗涤3×5 min，按照TUNEL检测试剂盒说明书配制检测液，在样品上加50 μl检测液，37℃避光孵育60 min，孵育至45 min时加入DAPI复染。PBS避光洗涤3×8 min，油封片后在荧光显微镜下观察染色阳性的细胞。每组5张切片，每张切片取5个互不重叠的视野计算染色阳性的细胞百分比。正常细胞核为蓝色，凋亡的细胞胞核为黄绿色。 统计学处理 计量资料以x±s表示，采用单因素方差分析。 2 结 果 各组小鼠神经功能缺损评分比较 假手术组小鼠未见神经功能缺损症状(0分);模型组神经功能缺损较为明显〔(±)分〕，OMT预处理组神