硫酸氢氯吡格雷片的含量测定方案设计.pdfVIP

硫酸氢氯吡格雷片的含量测定方案设计 一、设计背景 在全球包括发达国家和发展中国家进行的调查表明,动脉粥样硬化血栓形成即血栓栓 塞性疾病己经成为当今人类死亡的最重要病因,远远超过肿瘤和传染性疾病。由非传染性 疾病导致的死亡将是传染性疾病的两倍,其中一半左右是心脑血管疾病所致。抗血小板新 药氯吡格雷是第二个噻吩并吡啶药物，临床上常用它来治疗和预防血栓栓塞类疾病。由于 氯吡格雷的水溶性很差,难以提高其生物利用度,所以法国赛诺菲安万特公司率先将其开 发成水溶性较好的硫酸盐形式,并制成薄膜包衣片。用于降低近期或长期发生中风、心肌 梗塞或周边动脉血管疾病的病人的粥状动脉硬化。 图1 硫酸氢氯吡格雷结构式 二、设计依据 国家药品转正标准第 47 册收载的硫酸氢氯吡格雷片的含量测定方案设计采用高效 液相色谱内标法,操作繁琐且其分离度和柱效不易达到要求，因此经文献调研采用高效液 相色谱法外标法测定硫酸氢氯吡格雷片的含量，操作简便，准确可靠，经济环保，精密度 好，以便更好地控制产品的质量。 三、实施方案 （一）仪器与材料 1.仪器 电子天平、高效液相色谱仪 （岛津）、色谱工作站、超声机、超纯水机，50ml,100ml 容量瓶等。 2.材料 硫酸氢氯吡格雷对照品(中国药品生物制品鉴定所)、硫酸氢氯吡格雷片(市售)、甲醇 （色谱纯）、三乙胺 （色谱纯）、磷酸二氢钠、乙酸铵、去离子水。 （二）测定方法 1.流动相的选择 根据文献的报道，尝试乙腈-磷酸二氢钠溶液、乙酸铵－乙腈溶液、甲醇-水-三乙胺 及不同的配比作为流动相。经实验确定流动相的优劣，评价条件为硫酸氢氯吡格雷峰的保 留时间和峰形，确保硫酸氢氯吡格雷与相邻峰可以完全分离，以此为标准确定最终的流动 相组成。 2.检测波长的选择 根据文献的报道，选择270nm作为检测波长。 3.对照品溶液的制备 精密称取50mg硫酸氢氯吡格雷对照品，放置50ml容量瓶中用甲醇定容，摇匀。配制 成1mg/ml的贮备液。分别移取1、2、3、4、5ml贮备液置于100ml容量瓶中用甲醇定容， 配置成0.01、0.02、0.03、0.04、0.05mg/ml的硫酸氢氯吡格雷的对照品溶液。 4.供试品溶液的制备 取市售的硫酸氢氯吡格雷片20片，精密称量，研磨，取粉末适量，精密称定，放置 100ml容量瓶中，加入甲醇，超声，提取30min使样品溶解完全，放冷至室温后加甲醇稀 释至刻度线，摇匀，经滤纸过滤，取续滤液，既得硫酸氢氯吡格雷的供试品溶液。 5.阴性供试品溶液的制备 按硫酸氢氯吡格雷片处方比例使用微晶纤维素、羟丙纤维素及硬脂酸镁等辅料制备成 不含硫酸氢氯吡格雷的阴性供试品片，按照4 中所述方法配制硫酸氢氯吡格雷阴性供试品 溶液。 6.色谱条件 （1）色谱柱：ZORBAX C18。 （2）色谱柱温：25℃。 （3）进样室温度：室温。 （4）进样体积：10μl。 （5）流速：1.0mi/min。 （6）紫外检测器，检测波长为270nm:在无杂质干扰的情况下，以硫酸氢氯吡格雷的 最大吸收波长作为测量波长，检测波长的选择依实际情况而定。 7.阴性干扰实验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液，注入高效液相色谱仪测定，结果 应使硫酸氢氯吡格雷相应保留时间处无干扰。记录硫酸氢氯吡格雷的保留时间，计算分离 度，判定是否可以达到良好的分离效果。记录见表1。 表1 专属性实验结果 物质名称 保留时间 （min） 分离度 硫酸氢氯吡格雷 8.线性关系的确定 取3中所配制的对照品溶液，0.01、0.02、0.03、0.04、0.05mg/ml，分别进样10μ l，依次按浓度由低到高的顺序，按色谱条件的方法注入高效液相色谱仪进样分析，分别 记录硫酸氢氯吡格雷的色谱峰峰面积每个浓度。以各对照品溶液的浓度 （mg/ml）为横坐 标，以对照品峰面积为纵坐标，绘制硫酸氢氯吡格雷的标准曲线。结果记录在表2中。 表2 硫酸氢氯吡格雷的线性关系结果 硫酸氢氯吡格雷峰 硫