板蓝根颗粒中腺苷的含量测定方案.pdfVIP

板蓝根颗粒中腺苷的含量测定方案 一、设计背景 板蓝根颗粒是由板蓝根为主要材料，加蔗糖、糊精等辅料经一定制备工艺制成的中成药 制剂。颜色为浅黄色至棕褐色的颗粒；用舌尖品尝适量颗粒，味道应甜、微苦。板蓝根颗粒 具有清热解毒、凉血消肿、利咽的功效，用于风热感冒以及病毒性感冒引起的咽喉肿痛、口 咽干燥、腮部肿痛、急性扁桃体炎等病症的治疗有较好的作用效果，在临床中也广泛使用， 而在测定板蓝根颗粒中发现有四种成分的含量 〔腺苷、尿苷、鸟苷、(R,S)-告依春〕，其中， 腺苷作为板蓝根颗粒抗病毒功效的主要成分之一，也是板蓝根颗粒质量检测控制的重要指标， 通过对板蓝根颗粒中腺苷含量测定分析，能够有效鉴别和判断板蓝根颗粒的质量。腺苷的含 量测定方法有薄层扫描法、薄层-紫外法、紫外分光光度法及高效液相色谱法等。而高效液相 色谱法具有简便、快递、灵敏、重现性好等特点。因此，采用高效液相色谱法和梯度洗脱测 定板蓝根颗粒中腺苷含量具有很大的作用和意义。 二、设计依据 为保证板蓝根颗粒中含量的安全性和有效性，促进企业的发展，提高市场竞争力，对生 产成品中的含量也需要进行严格质量的把控，此方案根据 《中国药典》 （2020版)一部板蓝根 颗粒中腺苷的含量测定为依据，选用高效液相色谱法来进行检测。 三、设计方案 （一）仪器和试剂 1.仪器：高效液相色谱仪 （岛津）、L-7400 紫外可见检测器、电子天平 （湘仪）、 BOLON-CUSC-320超声波清洗器 （上海波龙电子设备有限公司）、离心机、干燥箱、研钵、 锥形瓶、100ml容量瓶、尼龙66过滤膜 （0.45μm）、玻璃棒、烧杯、滤纸 （定量）、移液管、 试剂瓶 2.试剂：板蓝根颗粒 （批号云南白药集团股份有限公司，每袋10g，市售）、 腺苷对照品 （中国药品生物制品检定所，批号：879-200001）、甲醇 （色谱纯）、水 （蒸馏 水）、乙腈,乙醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯 （二）色谱条件 1.色谱柱：C18 2.流动相：甲醇-1% 醋酸(梯度洗脱) 3.流速：1ml ·min-1 4.柱温：30℃ 5.检测波长：270nm 在此条件下，样品中腺苷与其他组份获得了较满意的分离效果，结果如下： （三）溶液的配制 1. 对照品：用电子天平精密称取 100mg干燥至恒重的腺苷对照品,放置在 100ml的容量 瓶中,用量筒加30%甲醇溶解并稀释至刻度线,再用胶头滴管加入30%甲醇定容至刻度线，充分 摇匀，用0.45μm微孔滤膜进行过滤，得到浓度为0.1mg ml-1的腺苷为对照品溶液。 · 2. 供试品：随机选取板蓝根颗粒样品5袋,倒入研钵中研成细粉,然后精密称取磨适量磨 好的细粉(约0.5g)置5ml量瓶中,用10ml量筒量取适量的水用滴定管稀释至刻度线，置超声波 4 清洗器超声处理60分钟,加入适量的水至刻度线,充分摇匀,放置冷却，再用1x10g离心机分离 10分钟，取上分离好的清液用0.45μm微孔滤膜进行过滤后,即可得到腺苷供试品溶液。 （一）线性关系的测定 用10ml量瓶分别精密量取腺苷对照品溶液0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、 5.0ml、10.0ml, 分别倒入置10ml量瓶中,用胶头滴管加入30%甲醇稀释定容至刻度,制成不同浓 度的对照品溶液，按色谱条件来进样检测分析，对不同进样量的色谱峰值变化进行记录。结 果显示,在0.1 2.0ug范围内,以腺苷峰面积为纵坐标，以腺苷进样量(μg)为横坐标进行回归,回 ~ 归方程为:Y=3.218×10X-2.19x10*(r=0.9995),表明腺苷在0.1～0.2μm范围内与峰面值和线性关 系表示良好。 （二）精密度试验 ―¹ 用胶头滴管精密吸取30μg ·ml 腺苷对照品溶液20μl,这个过程需按色谱条件重复进样 5次,可以测定腺苷峰面积分值，并记录峰面积，结果腺苷峰面积RSD为0.84%。表明仪器的 精密度良好。 （三）重复性试验 取同